wb转膜封闭的作用(WB转膜效果)
WB转膜效果
转膜的时候电压40v，可以看到电流先下降后上升。我转膜的时候就这样的，转膜效果挺好的。转膜液随着使用次数增多，电阻增大，相应电流下，电压增大，建议每次转膜液使用2～3次就换新的，这个是正常的，恒压的时候，电流也是会变化的，这是关于电泳液的问题，用的时间久了就会出现这样的问题，可以经常换电泳液
wb转膜用的膜
wb转膜的膜叫PVDF膜或NC膜！
wb转膜转过了
染色原理：丽春红，也称猩红，带负电荷，可以与带正电荷的氨基酸残基结合，同时丽春红也可以与蛋白的非极性区相结合，从而形成红色的条带。
丽春红染色液，用于WB转膜效率检测，它与下游WB检测完全兼容，无任何干扰。丽春红对蛋白的染色是可逆的，染色后可以用蒸馏水，PBS或者其他溶液洗去。可用于PVDF膜、硝酸纤维素膜和醋酸纤维素膜上蛋白的检测，不适用于尼龙膜上的蛋白检测。
wb转膜方法
wb条带跑开之后，要进行转膜，把跑好的胶片转移到膜上，转好之后需要在转膜仪上转差不多三个小时，三个小时之后关闭转膜仪，把膜打开就会看到胶片上的条带全部都转移到膜上了，然后用泡好的牛奶对膜进行封闭处理，填充膜表面的凹陷，最后用pbs冲洗，这样膜上就是干干净净的条带了，直接可以用来扫膜观察了。
wb转膜转花了
wb膜就是用WB技术做出来的几种膜，有Nc膜，尼龙膜，PVDF膜。
WB是一种把电泳分离的组分从凝胶转移到一种固相支持物(NC膜或PVDF膜)，并以针对特定氨基酸序列的特异性试剂作为探针检测。WB采用抗体作为探针，抗体可以与附着在固相支持物的靶蛋白的抗原表位发生抗原-抗体免疫反应。这种技术的作用是对细胞或组织提取的蛋白混合物(即总蛋白混合物)中的某一特异蛋白进行鉴别和半定量分析，旨在鉴别特异性蛋白的类型(如亚型、聚体、剪切体等)和蛋白表达量的变化。
WB转膜多久
wb条带跑开之后，要进行转膜，把跑好的胶片转移到膜上，转好之后需要在转膜仪上转差不多三个小时，三个小时之后关闭转膜仪，把膜打开就会看到胶片上的条带全部都转移到膜上了，然后用泡好的牛奶对膜进行封闭处理，填充膜表面的凹陷，最后用pbs冲洗，这样膜上就是干干净净的条带了，直接可以用来扫膜观察了。
wb 转膜
B+W的做工和玻璃还有镀膜都是不错的，综合评分是第一。肯高的UV，别买太低端的就没事，否则会影响成像，肯高的买也要买多层镀膜的，B+W也是，单层或者无膜的意义不大。
CPL肯高的就可以了，B+W太贵了，而且不是太常用的东西。
钱富裕的话，买B+WMRC的UV和肯高的CPL.
WB转膜原理
Western Blot 实验原理
WB 是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测的方法。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。
Western Blot 分类
根据显色方法主要有以下几种：
放射自显影
底物化学发光 ECL
底物荧光 ECF
底物 DAB 呈色
现在常用的有底物化学发光 ECL 和底物 DAB 呈色，体同水平和实验条件的是用第一种方法，目前发表文章通常是用底物化学发光 ECL。只要买现成的试剂盒就行， 操作也比较简单，原理如下（二抗用 HRP 标记）：反应底物为过氧化物 + 鲁米诺，如遇到 HRP，即发光，可使胶片曝光，就可洗出条带。
wb转膜的膜叫什么
封闭完后，浸泡在tbst里面，四度保存。
wb转膜的注意事项
不能。转膜不及时造成扩散。蛋白在凝胶中是会弥散的，通常都是完成电泳后就尽快转膜，否则弥散后有些实验结果就无法判断了。转膜时的注意事项：
1、转膜缓冲液：甘氨酸 2.9g；Tris 5.8g；SDS 0.37g；甲醇200ml；加双蒸水定容至1000ml。
2、转膜装置从下至上依次按阳极碳板、24层滤纸、NC膜、凝胶、24层滤纸、阴极碳板的顺序放好，滤纸、凝胶、NC膜精确对齐，每一步去除气泡，上压重物，将碳板上多余的液体吸干。接通电源，恒流，转移1.5h。
3、转移结束后，断开电源将膜取出，割取待测膜条做免疫印迹。将有蛋白标准的条带染色，放入膜染色液中50s后，在50%甲醇中脱色至背景清晰，然后用双蒸水洗，风干夹于两层滤纸中保存，留与显色结果作对比。扩展资料1、用于分离和纯化双链DNA片段的非变性聚丙烯酰胺凝胶。在未变凝胶中分离DNA的缺点是DNA的迁移率受碱基组成和序列的影响。由于无法得知未知DNA的迁移是否反常，不能用未变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳确定双链DNA的大小。2、用于分离及纯化单链DNA片段的变性聚丙烯酰胺凝胶。
WB转膜不完全
湿转与半干转（转膜方式）【WB实验外包】1。湿转，顾名思义，就是由滤纸，膜，胶组成的三明治泡在转膜液中完成的转膜液通常的配方为：Tris 3.0 g，Glycine 14.4 g，甲醇：200 ml,加去离子水至1000 ml2.半干转，三明治在转膜过程中并没有浸没在转膜液中，但在转膜之前用相应的电转液浸泡滤纸，膜，胶一定时间。3.半干转转膜效率高，25到135kd蛋白都可大方跑出，转膜条件20-25V，1.0-1.5A，30min，0.45膜。本人亲自实验数十次均无问题，滤纸应用伯乐厚滤纸每边一张即可，充分吸收4℃预冷转膜液，因转膜液用量只需要相对极少，一般不回收转膜液，永远用最新的，一般均可获得较好的转膜效果。4..湿转广泛应用于各种分子量的蛋白，一般30kd以下本人转30min，30到70ka转60min，70至140kd转90到110min.转膜条件200ma，30以下用0.22膜，以上用0.45膜。湿转耗费转膜液较多，操作相对复杂，效率不高，但适应广泛，对温度的控制较好，不容易出错。