pvdf转膜滤纸的作用(转膜时,滤纸,凝胶,pvdf膜大小如何裁剪?为什么?)

转膜时,滤纸,凝胶,pvdf膜大小如何裁剪?为什么?

1、转膜时，1张5.5×8.5cm的PVDF膜以及2张6.5×10cm的滤纸需要被准备，由于膜会受到手上的蛋白的污染，必须要戴手套切滤纸和膜。在甲醇中浸没切好的PVDF膜超过15秒即可。

　　2、将浸过的PVDF膜、两张滤纸、两块海绵垫以及转膜用的夹子放置于加有转移液的搪瓷盘里。

　　3、将夹子打开，在转膜液中放入黑的一面，海绵、滤纸、分离胶、PVDF膜、滤纸、海绵由下往上依次放入。

　　4、合好夹子，放入转移槽中，使夹的白面对着槽的红面，夹的黑面对槽的黑面，将电接通，电转移时会有热产生。有较大空隙在槽的一边，降温将事先准备好的冰盒放入。在一个大的盛满冰的容器中放入整个电泳槽（建议使用大的塑料泡沫盒子）

转膜时,滤纸,凝胶,PVDF膜大小如何裁剪?

试剂：tris、Hcl、Nacl、脱脂牛奶、甲醇、甘氨酸、tuwen20、一抗、二抗、显色剂及SDS-PAGE需要的试剂（tris、Hcl、TEMED、SDS、过硫酸铵、丙烯酰胺、N,N-甲叉双丙烯酰胺、甘氨酸、非预染蛋白Marker、甲醇、乙酸、考马斯亮蓝R250）、预染蛋白Marker耗材：滤纸、PVDF膜或NC膜、乳胶手套等仪器：电泳仪、电转槽、摇床、制冰机（电转时需冰浴）等

PVDF膜的制备

PVDF管补焊的焊接方法跟pp管差不多，都是可以采用热熔焊接。比如热熔对焊、热熔承插都常用的PVDF管的焊接技术。

焊接的步骤也同pp管相似，要把握好焊接设备的温度，253℃~273℃。具体可参考pp管的热熔焊接步骤。PVDF可以热塑焊的，有PVDF焊条的。和普通PP/PVC一样的可以焊接。

转膜时滤纸凝胶pvdf膜大小如何裁剪为什么

蛋白免疫印迹( Western Blot) 是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF 膜上。

目前主流方法是电转印法，分为湿式转印与半干转印。

湿式转印是将胶块垂直方向夹在湿式转印槽内进行电转印。

以E-Blotter湿转槽为例，一般使用垂直电泳槽的缓冲液槽体，将内部垂直电泳电极替换为湿转的转印芯，将胶块、滤纸、转印棉夹到转印芯内部，将槽体倒满缓冲液通电进行电转印。

半干转印是将胶块水平方向夹在半干转印槽内进行电转印。

以Yrdimes半干转印槽为例，将滤纸、转印棉用缓冲液浸润后，与胶块一起夹到转印槽内，通电进行电转印。

一般来说湿转相对半干转印速度上要慢，设备成本上半干转印槽也相对更贵。

通常小分子量的蛋白半干转效果比较好，大分子量（100KD）以上建议湿转。

pvdf膜会转过吗

pvdf超滤膜可以保存两年。保存前应清洗干净，并用以下任何一种溶液溶液作为保护液：

1.80~100%甘油（最佳）

2.PH在2-3范围的磷酸

3.浓度在1000ppm的苯甲酸或苯甲酸钠

3.浓度在1000~5000ppm亚硫酸氢钠或偏亚硫酸氢钠用亚硫酸氢钠或偏亚硫酸氢钠保存膜组件，需要每隔6个月用净水冲洗后再用新配制的药液浸泡。浸泡后的膜组件可保留在系统中，关闭所有阀门或从系统中取出密封与塑料袋。以上所述新的膜组件的保存条件同样适用于存储使用过的膜组件。存储后的膜组件在投入使用前应排净保护液。并按照上述方法进行清洗。

转膜时滤纸的要求

光面朝上，因为光面是经过附膜处理的，这样才会有更好的过滤效果。

大部分滤纸由棉质纤维组成，按不同的用途而使用不同的方法制作。由于其材质是纤维制成品，因此它的表面有无数小孔可供液体粒子通过，而体积较大的固体粒子则不能通过。这种性质容许混合在一起的液态及固态物质分离。

pvdf膜的孔径大小

PVDF膜即聚偏二氟乙烯膜（polyvinylidene fluoride）是蛋白质印迹法中常用的一种固相支持物。PVDF膜是疏水性的，膜孔径有大有小，随着膜孔径的不断减小，膜对低分子量的蛋白结合就越牢固。大于20000的蛋白选用0.45um的膜，小于20000的蛋白选用0.2um的膜。PVDF膜在使用是需预处理，用甲醇处理的目的是活化膜上的正电基团，使其更容易与带负电的蛋白结合。

sartorius醋酸纤维素膜(CA)具有很高的流速和热稳定性以及非常低的吸附。0.2µm的滤膜非常适合于水溶液、缓冲液、血清和培养基的除菌过滤。0.45µm的滤膜非常适合于HPLC的流动相过滤。关于得到膜吸附的公开结果是比较困难的，其与过滤的物质、过滤的条件和采用的测定方法以及被测定的膜没有被预先除菌有关。

pvdf膜的成型工艺

CPVC是氯化聚氯乙烯，氯含量比聚氯乙烯（PVC）还要高。PVDF是聚偏氟乙烯，一个结构单元中有2个氟原子连在同一个碳原子上。两种聚合物其实不具有可比性，因为性能差别很大，且应用方向完全不同。CPVC一般和PVC作比较：因为它们结构和性能较为相似。CPVC的耐候性好、耐老化、耐腐蚀、玻璃化温度高、有良好的阻燃性和抑烟性、热膨胀系数低、导热率低等，其力学性能也明显优于PVC。

CPVC的主要缺点有：CPVC熔融粘度比PVC树脂要高得多，因此成型温度要比PVC高，加工相对困难，剪切生热促使熔体温度升高加速分解；CPVC熔融温度接近它的热分解温度，因此CPVC加工窗口窄，温度可调节的范围较PVC树脂要窄，产品生产控制过程中要求较高；CPVC耐冲击性能较PVC差。CPVC和PVDF比较的话，我只列价格，价格的巨大差异也说明了二者根本不具有可比性。当然，如果要全方面比较也行，但是比较花时间了。等别人给你解答了。

价格：CPVC约20元一公斤，PVDF约260元一公斤

pvdf膜转膜时间

1. 硝酸纤维素膜

硝酸纤维素膜是蛋白印迹最广泛使用的转移介质，对蛋白有很强的结合能力，而且适用于各种显色方法，包括同位素，化学发光（Luminol类）、常规显色、染色和荧光显色；背景低，信噪比高。

NC膜的使用也很简便，比如不需要甲醛预处理，只要在无离子水面浸润排出膜内气泡，再在电泳缓冲液中平衡几分钟就可以了；比如NC膜很容易封闭，也不需要特别严谨的清洗条件。

转移到NC膜上的蛋白在合适的条件下可以稳定保存很长时间，不过要注意的是纯的硝纤膜在比较脆，又容易卷，操作要小心，不适合用于需要多次重复清洗的用途--因为经不起多次“折磨”。

选择硝纤膜时要注意的是选择合适的孔径，通常20KD以上的大分子蛋白用0.45um孔径的膜，小于20KD的话建议选择0.2um的，如果小于7KD的话最好选择0.1um的膜。另外还要注意选择纯的NC膜--混有含醋酸纤维（CM）的NC膜结合力会有所降低。

另外提醒一句：由于NC膜上结合的蛋白会因为一些去污剂而被代替，因此在封闭时最好使用较温和的Tween20，而且浓度不要超过0.3%（据说0.05%效果最好）。

一般而言，NC膜越纯，其蛋白结合能力就越高，所以要增加WB的灵敏度和分辨率，提高所使用膜的纯度是个可以考虑的选择。

如果NC膜搀杂一些醋化纤维素--这在前面已经提到，会影响蛋白质结合。Protran由于是纯NC膜，比较脆，机械耐受力欠佳，需要小心操作，如果担心自己“粗手粗脚”，那么就可以考虑一下Opt itran或者Pall公司的以耐受力著称的BioTrace NT Nitrocellulose Transfer Membrane。

卷膜肯定是最实惠的选择，只不过要自己动手裁剪--切记，必须带手套操作。

2. PVDF膜

与硝酸纤维素膜相比，PVDF膜在蛋白质截留能力，机械强度和化学相容性上都更优越的性能。

市售硝酸纤维素膜的典型结合量是80-100μg/cm2,而PVDF膜结合量是100-200μg/cm2（而结合强度PVDF比硝纤膜强6倍！）。

但是PVDF膜最大的优点不仅于此：更好的机械强度和化学耐受性使PVDF膜在各种染色应用和多重免疫检测中成为理想选择；而且单个凝胶的泳道复本可用于多种目的，特别是需要做N端蛋白测序，在相当“严酷”的清洗条件下，当尼龙或者硝纤膜已经降解的情况下PVDF膜依然保持本色，笑傲江湖。

所以PVDF也是要做蛋白测序的唯一选择。但不适合荧光。PVDF膜特别注意的是需要100%甲醇预处理（不超过15秒）再用缓冲液平衡，才能用，而且适用过程中万一干了也要同样程序再处理（不过要真出现这种问题也是自己欠扁，谁要你不小心呢，转膜前处理也就罢了，转膜后再这样处理可能会影响后继的抗体识别呢）。

PVDF膜同样分0.45um和0.2um的，后者孔径小，对小分子蛋白有较好的拦截吸附，背景可能会比前者稍高。

pvdf膜制备工艺流程

特点一：亲水性好，湿强度好：它具有天然的湿润性能，无任何润湿剂，湿强度高，拾取和抽滤操作方便，是过滤水相溶液的理想选择；

特点二：化学相容性好：它拥有极好的化学抗性，耐受大多数的有机溶剂和常规腐蚀性液体， HPLC 制备常用的乙睛、甲醇、乙醇等通通可以拿下，比 PVDF 膜的化学兼容性更出色，可以放心地用于过滤有机溶剂或混合溶剂；

特点三：极低溶出物：它相比于其他聚合物浇铸的滤膜如 PVDF 、尼龙膜、混合纤维素膜等，溶出物更少，确保样本的纯度以及下游的 HPLC 、细胞培养等实验。

特点四：超低蛋白结合：根据测算，它的蛋白吸附量是全部膜中极低级别的，意味着过滤蛋白溶液或含蛋白的培养基时蛋白损失量小；

特点五：可用任何方法灭菌消毒。它可耐高温达180℃，无论是干热灭菌、湿热灭菌，或者紫外线、环氧乙烷等灭菌，再生纤维素膜均可以耐受。