提取DNA结合液cb的作用(DNA结合液的作用)
DNA结合液的作用
DNA和RNA都属于核酸,是遗传物质. 由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物,为生命的最基本物质之一.核酸广泛存在于所有动物、植物细胞、微生物内、生物体内核酸常与蛋白质结合形成核蛋白.不同的核酸,其化学组成、核苷酸排列顺序等不同.根据化学组成不同,核酸可分为核糖核酸(RNA)和脱氧核糖核酸(DNA).
1.DNA是储存、复制和传递遗传信息的主要物质基础.
2.RNA在蛋白质合成过程中起着重要作用,其中转移核糖核酸,简称tRNA,起着携带和转移活化氨基酸的作用;信使核糖核酸,简称mRNA,是合成蛋白质的模板;核糖体的核糖核酸,简称rRNA,是细胞合成蛋白质的主要场所.
DNA杂交液的作用
DNA分子杂交:是检验目的基因是否导入受体细胞,是用带有放射性元素的DNA一条链去和另一条连进行碱基互补配对;分子杂交是用RNA和一条DNA链杂交,是检测目的基因是否转录,都是看其是否出现杂交带;抗原抗体杂交就是蛋白质见的检测,是检测目的基因是否翻译,就像人体内特异性免疫一样。
互补的核苷酸序列通过Watson-Crick碱基配对形成稳定的杂合双链分子DNA分子的过程称为杂交。杂交过程是高度特异性的,可以根据所使用的探针对已知序列进行特异性的靶序列检测。
杂交的双方是所使用探针和要检测的核酸。该检测对象可以是克隆化的基因组DNA,也可以是细胞总DNA或总RNA。根据使用的方法被检测的核酸可以是提纯的,也可以在细胞内杂交, 即细胞原位杂交。探针必须经过标记,以便示踪和检测。使用最普遍的探针标记物是同位素, 但由于同位素的安全性,发展了许多非同位素标记探针的方法,例如,使用荧光分子。
DNA提取液的作用
一、DNA提取(粗提取)
1、酚抽提法:先用蛋酶K、SDS破碎细胞,消化蛋白,然后用酚和酚-氯DNA大小为100-150kb
2、甲酰胺解聚法:破碎细胞同上,然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合,再透析获得DNA可得DNA200kb左右。
3、玻璃棒缠绕法:用盐酸胍裂解细胞,将裂解物铺于乙醇上,然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅,DNA沉淀液绕于玻棒。生成DNA约80kb。
4、异丙醇沉淀法:基本同1法,仅用二倍容积异丙醇替代乙醇,可去除小分子RNA(在异丙醇中可溶状态)
5、表面活性剂快速制备法:用Triton X-100A或NP40表面活性剂破碎细胞,然后用蛋白酶K或酚去除蛋白,乙醇沉淀或透析。
6、加热法快速制备:加热96℃-100℃,五分钟,然后离心后取上清,可用于PCR反应。
7、碱变性快速制备:先用NaOH作用20分钟,再加HCI中和,离心后取上清,含少量DNA。
二、DNA的浓缩(精提取)
1、固体聚乙二醇(PEG)浓缩:用透析袋外敷PEG至合适量。
2、丁醇抽提浓缩:DNA溶液中水可分配到正丁醇或仲丁醇,但DNA不会。因此重复几次可显著减少DNA体积。
3、乙醇或异丙醇沉淀:(1)需要阳离子盐的存在,NaAc最常用,NaCl对含SDS样品好,NH4Ac去除dNTP好。PiCl沉淀RNA好,但不能用于反转录前。(2)沉淀温度与时间;0℃一4℃,12000g,10分钟,小于100bp DNA需超速离心。
4、精胺沉淀法:与DNA结合后使DNA结构凝缩沉淀,需在无盐或低盐溶液。
dna溶解液成分
是水溶性物质。
DNA是极性分子,水也是,DNA可以溶解在水里。提取的DNA可以直接溶解在超纯水中,或者溶解在TE溶液中。溶解在水里是无色溶液。
具有水溶性的物质分子中通常含有极性基团如-OH、-SO3H、-NH2、-NHR、-COOH等或不太长的碳链。水是最廉价的溶剂,来源广,无污染。水溶性高分子之所以溶于水,是因为在水分子与聚合物的极性侧基之间形成了氢键。
水溶性高分子的溶解具有一个重要的条件,即溶质和溶剂的溶度参数必须相近,但这仅为溶解的必要条件而非充分条件,还需考虑高分子的结晶结构的影响。
DNA裂解液的成分及作用
不一定要用血液,唾沫等体液,毛发等只要是你的身体组织都可以做!
dna结合液的作用和功能
因为在70%乙醇里DNA是不溶的,而盐离子却可溶。 沉淀DNA时总会加入高浓度的盐,加盐的目的是破坏能使蛋白质保持稳定的两个因素,使蛋白和DNA分离并沉淀下来。而此时盐的阳离子会与DNA结合形成DNA-阳离子盐溶于溶液中,再用无水乙醇可以将DNA-阳离子盐沉淀下来,但这样DNA中就含有较多的盐离子,这会影响下一步实验的进行,所以要用70%乙醇洗涤DNA沉淀。
DNA结合液
1.生长素功能 主要结构:吲哚乙酸IAA
-促进伸长生长 -顶端优势 -促进器官和组织分化 -促进果实发育(单性结实:刺激子房发育成果实),番茄,黄瓜等; -影响性别分化 -促进菠萝开花 -促进插条生根 -防止器官脱落
2赤霉素 主要结构:赤霉烷GA
运输:不表现极性运输
作用机理:a促进生长,促进细胞扩大——增加细胞壁延展性:可能是消除细胞壁中Ca2+的作用,伸展性加大;或是提高木葡萄糖内转糖基酶活性,切开细胞壁的木葡聚糖。
b RNA和蛋白质的合成——诱导淀粉酶的形成胚——GA——糊粉层——淀粉酶
GA主要是通过诱导一种DNA结合蛋白的产生,与淀粉酶基因上游区的一定核苷酸序列结合,最终促进基因表达,导致淀粉酶mRNA的生成。
赤霉素功能:-促进茎叶生长 -促进麦芽糖化 -打破休眠 -促进抽苔和开花 -性别分化:雄花的分化 -防止脱落
3细胞分裂素类 结构:腺嘌呤的衍生物 CK
运输:主要在根尖合成,经木质部运到地上部分,是无极性的。
作用机理:受体——核糖体
a转录水平的控制:促进RNA聚合酶的合成,增加mRNA丰度
b翻译水平的控制
c蛋白质合成速度加快
主要功能:-促进细胞分裂,扩大 细胞分裂包括:核分裂和胞质分裂
dna提取液中各成分的作用是什么
氢氧化钠可以使DNA水解。
氢氧化钠的作用:在碱裂解法中,氢氧化钠的作用原理是使细胞膜由脂双层结构向囊泡化转变,从而使细胞裂解,氢氧化钠的作用既能裂解细胞让细胞内含物释放出来,又是质粒DNA和染色体DNA得以分离的关键。
DNA全称是“脱氧核糖核苷酸”,是一种蛋白质。
NaOH是强碱,可以使蛋白质变性。
蛋白质变性会有许多性质改变,比如颜色、状态等。