双酶切的作用(双酶切反应)
双酶切反应
看你DNA量多少，酶量多少，DNA是否干净。一般算好量，尽量把酶切时间控制在1-4小时之内，时间过长容易出现星号活性，或者连接效率降低等。
双酶切反应时间
一般能够保存五六个小时
双酶切反应时,根据采用的内切酶,怎样实施酶切方案
单酶切就是只用一个限制性内切酶去切你的质粒，环状的质粒就成为线状的了，但质粒的大小不变
双酶切用两个限制性内切酶，质粒上就产生了两个缺口，环状质粒就变成两段线状dna了。回收你需要的那一段，因为它的两端和你的目的基因带有互补的黏性末端（当然目的基因也要用这两种酶切才行），在t4dna连接酶在作用下，它们就连到一起了。
双酶切反应体系包括
要是环状DNA就有两个酶切位点，要是线性DNA就有一个酶切位点，对于二型限制性内切酶切点与酶切位点是一样的，一，三型的有识别位点与切割位点是不同的。
双酶切反应条件如何确定
双酶切就是为了验证是否有目的基因，如果双酶切条带正确，而且PCR也没有问题，就可以确定质粒构建成功。
质粒具有稳定可靠和操作简便的优点。如果要克隆较小的DNA片段(<10kb)且结构简单,质粒要比其它任何载体都要好。
在质粒载体上进行克隆,从原理上说是很简单的，先用限制性内切酶切割质粒DNA和目的DNA片段, 然后体外使两者相连接, 再用所得到重组质粒转化细菌,即可完成。但在实际工作中, 如何区分插入有外源DNA的重组质粒和无插入而自身环化的载体分子是较为困难的。
通过调整连接反应中外源DNA片段和载体DNA的浓度比例,可以将载体的自身环化限制在一定程度之下,也可以进一步采取一些特殊的克隆策略,如载体去磷酸化等来最大限度的降低载体的自身环化,还可以利用遗传学手段如α互补现象等来鉴别重组子和非重组子。
双酶切反应体系
质粒的话,双酶切中间有几十bp以上,切出来的条带就是两条,这个你应该能判断的.
如果是pcr产物酶切出现了两条极近的带,那么很有可能是因为pcr产物纯化时有杂带污染,一开始跑胶的时候看不出来,后来你回收浓缩再加上酶切,再跑电泳的时候就出现了两条极近的带.
其实将这两条带回收（上面那条是目的条带的可能性要大些）,进行连接,只要操作和实验条件好的话,菌落的阳性率也挺高的,因为是双酶切连接.
双酶切反应需要注意的事项
连接前最好将水、插入片段和载体混合好以后置于45度水浴5min，马上置于冰上冷却，再加入buffer和ligase。
双酶切时间及其体系：需要强调的是很多人建议酶切过夜，其实完全没有必要，我一般酶切3个小时，其实1个小时已经足够。应用大体系，如100微升。纯化问题：纯化PCR产物割胶还是柱式，我推荐柱式，因为割胶手法不准，很容易割下大块的胶，影响纯化效率。现在的柱式纯化号称可以祛除引物，既然如此，酶切掉的几个碱基肯定也会被纯化掉了。所以，PCR产物和双酶切产物的纯化均可应用柱式纯化。我用的是TAKARA的纯化柱试剂盒 酶量的问题：以TAKARA的为例，其对1单位酶的定义如下：在50 μl 反应液中，30℃温度下反应1小时，将1 μg 的λDNA完全分解的酶量定义为1个活性单位(U)。而该酶浓度约为15单位/微升，在除外酶降解的 因素外，该酶可分解15μg的DNA，而一般从1-4ml菌液提出的 DNA约为3μg，而PCR纯化后的产物（50体系）约为3μg，所以即便全部加进去，只要纯化的 质量好，酶切完全切得动。双酶切反应缓冲液不可共用
BSA”经常作为“Body Surface Area”的缩写来使用，中文中表示：“体表面积”。
“BSA”（“体表面积）释义：
英文缩写词：BSA
英文单词：Body Surface Area
缩写词中文简要解释：体表面积
中文拼音：tǐ biǎo miàn jì
缩写词流行度：1561
缩写词分类：Medical
缩写词领域：Oncology
关于BSA的扩展资料：
1. The extent is generally related to their potency, frequency of application, the patient's body surface area, and the skin's ability to act as a barrier.抑制程度基本取决于他们的浓度，给药频率，患者的体表面积和皮肤的屏障能力。
2. Age, body surface area ( BSA ) and dialysate fill volume ( DV ) were not different between the two groups.两组的透析量（DV）、体表面积（BSA）和年龄差异无显著性。
3. The update is intended to prevent drug overdosing of children with low body weight, low body surface area, and very low serum creatinine.最新信息意图预防低体重、低体表面积和很低血清肌酸酐的儿童药物过量。
4. The cooling vest covers the torso and upper thighs about 40 % of whole body surface area.液冷背心可覆盖躯干和大腿上部，约占体表的40%。
5. There are four calculating models for human body surface area.目前，对人体体表面积的计算模型有4种。
双酶切反应要求两种酶各自需要的缓冲环境要相同
两个酶只相当于一个酶要具体看这两个酶的序列之间隔了多少个bp；还有就是如果这两个酶共用碱基的话就不行，有些酶的话隔的太近的话双酶切效率很低，需要分别单酶切
双酶切反应条件
要具体看这两个酶的序列之间隔了多少个bp，有些酶的话隔的太近的话双酶切效率很低，需要分别单酶切；还有就是如果这两个酶共用碱基的话就不行，两个酶只相当于一个酶。