pcr加入引物的作用(pcr加入引物的作用有哪些)
pcr加入引物的作用有哪些
PCR技术的原理是利用碱基互补配对的原则，把体内基因的复制在体外进行，从而得到大量的目的基因。主要原理如下：双链DNA分子在临近沸点的温度下加热时便会分离成两条单链的DNA分子，然后DNA聚合酶以单链DNA为模板，并利用反应混合物中的四种脱氧核苷三磷酸（dNTP）合成新的DNA互补链。此外，DNA聚合酶同样需要一小段双链DNA来启动“引导”新链的合成，因此新合成的DNA链的起点事实上是由加入在反应混合物中的一对寡核苷酸引物在模板DNA两端的退火位点决定的。在为每一条链均提供一段寡核苷酸引物的情况下，两条单链DNA都可以作为合成新生互补链的模板，因为在PCR反应中所选用的一对引物是按照与扩增区段两端序列彼此互补的原则设计的，因此每一条新生链的合成都是从引物的退火结合位点开始，并沿着相反(5’→3’方向)方向延伸。如此变性、复性、延伸三个过程反复循环，产生了目的片断的大量克隆。
PCR技术是模仿体内的条件，使基因扩增，所以在扩增体系中需要有DNA聚合酶、一定的pH值的缓冲液、要扩增的目的基因（模板），起始扩增的DNA目的片断的引物，及扩增需要的原料（四种三磷酸脱氧核糖核苷酸），Mg2+,DNA复性、变性及延伸温度与时间等。
pcr加入的引物有几种
引物的延伸是从3′端开始的，不能进行任何修饰。3′端也不能有形成任何二级结构可能，除在特殊的PCR（AS-PCR）反应中，引物3′端不能发生错配。
引物的5′端限定着PCR产物的长度，它对扩增特异性影响不大。因此，可以被修饰而不影响扩增的特异性。引物5′端修饰包括：加酶切位点；标记生物素、荧光、地高辛、Eu3+等；引入蛋白质结合DNA序列；引入突变位点、插入与缺失突变序列和引入一启动子序列等。
pcr技术中加入引物的作用
引物是一段短的单链RNA或DNA片段，可结合在核酸链上与之互补的区域，其功能是作为核苷酸聚合作用的起始点，核酸聚合酶可由其3′端开始合成新的核酸链。体外人工设计的引物被广泛用于聚合酶链反应、测序和探针合成等。引物是人工合成的两段寡核苷酸序列，一个引物与感兴趣区域一端的一条DNA模板链互补，另一个引物与感兴趣区域另一端的另一条DNA模板链互补。在PCR（聚合酶链式反应）技术中，已知一段目的基因的核苷酸序列，根据这一序列合成引物，利用PCR扩增技术，目的基因DNA受热变性后解链为单链，引物与单链相应互补序列结合，然后在DNA聚合酶作用下进行延伸，如此重复循环，延伸后得到的产物同样可以和引物结合。 PCR引物设计的目的是找到一对合适的核苷酸片段，使其能有效地扩增模板DNA序列。如前述，引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否。对引物的设计不可能有一种包罗万象的规则确保PCR的成功，但遵循某些原则，则有助于引物的设计。
PCR引物的作用
在PCR技术中，引物的作用是为了使脱氧核苷酸加到模板链上，使新链延长，没有引物，DNA聚合酶是不能将单个的脱氧核苷酸加到模板链上的。
而TaqDNA聚合酶是一种耐高温的DNA聚合酶，是从美国黄石国家公园的一个热泉中的一种耐热细菌中提取的，它的作用就是将脱氧核苷酸加到模板上后，将该脱氧核苷酸与原来的脱氧核苷酸间的磷酸二酯键连在一起，使脱氧核苷酸单链向前延伸，最终形成一个新的双链DNA分子。
pcr加入引物的作用有哪些方面
1.实时荧光定量PCR内参: 在不同的PCR反应管中已定量的内参和引物,内参用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记,下游引物不标记。在模板扩增的同时,内参也被扩增。 在PCR产物中,由于内参与靶模板的长度不同,二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来,分别测定其荧光强度,以内参为对照定量待检测模板。
2.选择:内参一般是固定的,可以用实验室之前就有的。或者用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记,下游引物不标记。
pcr中加入的引物有几种
PCR反应中有两条引物，即5′端引物和3′引物。设计引物时以一条DNA单链为基准（常以信息链为基准），5′端引物与位于待扩增片段5′端上的一小段DNA序列相同；3′端引物与位于待扩增片段3′端的一小段DNA序列互补。
引物设计的基本原则
• 引物长度：15-30bp，常用为20bp左右。
• 引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C 过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列参照。
• 引物内部不应出现互补序列。
• 两个引物之间不应存在互补序列，尤其是避免3 ′端的互补重叠。
• 引物与非特异扩增区的序列的同源性不要超过70%，引物3′末端连续8个碱基在待扩增区以外不能有完全互补序列，否则易导致非特异性扩增。
pcr技术中引物的作用是什么
PCR引物又称为寡核苷酸引物，也就是RNA，是由人工合成的，分为两种，引物1和引物2。由于DNA聚合酶只能从核苷酸链的5'端到3'端进行复制，也就是只能识别3'的尾端，而且只能把核苷酸连到已经和DNA模板互补产生的多核苷酸链上，所以引物1和2分别于双链DNA的两条链的尾部（就是末尾是3'端的那一边）结合，为那些脱氧核苷酸提供3'的末端，就相当于开了个头。然后在DNA聚合酶的作用下合成两条新链。而那段引物就成了新链的一部分。其实在生物体内的DNA复制也是这样的一个过程，只是引物是人体自身合成的。
pcr中引物的作用是什么
一小段寡聚的DNA，一般有两个（一对），分为上游引物和下游引物，分别指导DNA两条链的聚合。它们主要作用有两个，一个是和模板特异性结合来指导taq聚合酶合成所要的片段。一个是提供一个3‘端的－OH末端，只有拥有一个－OH末端，DNA聚合酶才能合成DNA。
在体内是由小段的RNA来提供的，在体外PCR试验中则用DNA，因为DNA比RNA稳定易于储存。