pcr技术缓冲溶液作用(pcr技术中的缓冲液)
pcr技术中的缓冲液
PCR反应需要加镁离子，并且镁离子浓度的总量应该比dNTPs的浓度高，常用1.5mmol/L。 镁离子是加在PCR反应的缓冲液中的，成分是最复杂的，除水外一般包括四个有效成分：
1、缓冲体系，一般使用HEPES或MOPS缓冲体系；
2、一价阳离子，一般采用钾离子，但在特殊情况下也可使用铵根离子；
3、二价阳离子，即镁离子，根据反应体系确定，除特殊情况外不需调整；
4、辅助成分，常见的有DMSO、甘油等，主要用来保持酶的活性和帮助DNA解除缠绕结构。 缓冲液的目的是提供合适的酸碱度与某些离子，而PCR反应五要素是：引物(PCR引物为DNA片段，细胞内DNA复制的引物为一段RNA链）、酶、dNTP、模板和缓冲液（其中需要Mg2+）。
pcr技术中的缓冲液是什么
就是给PCR提供的一个最适酶催反应条件。不同公司的buffer缓冲液都是不一样的，像离子浓度、PH等都有很大的差别。我们实验室用的是诺唯赞的PCR酶，上次我好奇打了他们的技术热线，大概都有些KCl、MgCl2、(NH4)2SO4、Tris-HCl等。 希望对你有帮助！
pcr反应液缓冲液
需要，因为PCR缓冲液就是给PCR反应提供的一个最适酶催反应条件。例如缓冲液中的镁离子在酶催化过程中，结合到酶－底物结合体上，从而使催化反应的活化能更加降低。使得反应能够进行。PH缓冲液是保证PCR反应正常进行的关键条件之一。
PCR反应的缓冲液的作用是给Taq DNA聚合酶提供一个最适酶催反应条件。
pcr中的缓冲液作用
基本常识 PCR包括7种基本成分：模板DNA、特异性引物、热稳定DNA聚合酶、脱氧核苷三磷酸（dNTP）、二价阳离子、缓冲液及一价阳离子。
其中缓冲液：一般使用Tris-Cl缓冲液，标准的为10mmol/L,并将其调节到8.3~8.8之间 配制方法（二种）： 0.1mol/L Tris-Cl(1000mL) Tris碱 12.11g；ddH2O 800mL；HCl 49mL 三者混匀充分溶解后，滴加浓盐酸调pH至8.0，定溶至1000mL 0.01mol/L Tris-Cl(1000mL) Tris碱 1.211g；ddH2O 800mL；HCl 49mL 三者混匀充分溶解后，滴加浓盐酸调pH至8.0，定溶至1000mL 各成分作用： Tris 本身是一级胺，其 pKa 为 8 因此在 pH 7.5~8.5 有良好的缓冲能力 CL- 有一定的弱酸性
pcr缓冲溶液的主要作用
PCR反应中缓冲液是一个重要的影响因素，特别是其中的Mg2+能影响反应的特异性和扩增片段的产率。目前最为常用的缓冲体系为l0～50mmol／L的Tris—HCl(pH8．2～8．3，20℃)，PCR标准缓冲液含有10mmol／L的Tris—HCl(pH8．3)、50mmol／L的KCl、1．5mmol／L的Mg2+、0.1g／L的明胶。在一般的PCR反应中，1．5～2．0μmol／L Mg2+是比较合适的(对应dNTP浓度为200μmol／L左右)。Mg2+过量能增加非特异扩增并影响产率。
现在认为限制KCl和明胶的用量值得提倡，尤其是BSA，虽其对酶有一定保护性，如果质量不好将起相反的作用，建议使用乙酰化的BSA。KCl在50mmol／L时能促进引物退火，大于此浓度时将会抑制聚合酶的活性。有的反应液以氯化铵或醋酸铵中的NH+才代替K+，其浓度为16．6mmol／L。
在PCR中使用10～50mmol／L Tris HCl，主要靠其调节pH使Taq DNA聚合酶的作用环境维持偏碱性。Tris缓冲液是一种双极化离子缓冲液，pKa为8．3(20℃)，△pKa为一0.021／℃。
在反应体系中加入适量(10％)的二甲基亚砜(DMSO)，虽然DMSO对聚合酶活性有一定抑制作用，但它可减少模板二级结构，提高PCR反应特异性。有报道指出甲酰胺或氯化四甲基铵(TMAC)均可提高反应特异性，而对酶活性没有明显影响。
PCR标准缓冲液对大多数模板DNA及引物都是适用的，但对某一特定模板和引物的组合，标准缓冲液并不一定就是最佳条件，因此各实验室可在此条件上，根据具体扩增项目进行改进。其中Mg2+浓度对扩增作用的特异性和产量有明显影响。Taq酶是一种Mg2+依赖酶，Mg2+浓度一般为1．5mmol／L左右，Mg2+浓度过低时，酶活力明显降低；过高时，酶可催化非特异性扩增。由于反应体系中的DNA模板、引物和dNTP都可能与Mg2+结合，因此降低了Mg2+的实际浓度。所以建议反应中Mg2+用量至少要比dNTP浓度高O．5～1．0mmol／L。
PCR反应常用的缓冲体系
PCR具有高度的特异性与灵敏度，受反应体系中各元素及反应条件的影响。主要影响元素是PCR反应体系中的模板、引物、酶促反应原料、酶、及反应的缓冲体系，反应条件主要包括PCR各过程的温度、时间和循环次数等。其次是PCR反应的总体积和PCR反应的促进剂及人员操作技术等元素。