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pcr技术引物的作用(pcr技术引物的作用有哪些)

更新:2022-11-05 20:15编辑:bebe归类:饮食养生人气:67

pcr技术引物的作用有哪些

引物,是指在核苷酸聚合作用起始时,刺激合成的一种具有特定核苷酸序列的大分子,与反应物以共价键形式连接,这样的分子称为引物。

引物通常是人工合成的两段寡核苷酸序列,一个引物与靶区域一端的一条DNA模板链互补,另一个引物与靶区域另一端的另一条DNA模板链互补。

所有的DNA复制都是从一个固定起点开始的,而且目前所知的DNA聚合酶都只能延长DNA链而不能从头合成DNA链。DNA复制时,往往先由RNA聚合酶在DNA模板上合成一段RNA引物,再由DNA聚合酶从RNA引物3’末端开始合成新的DNA链。

作用机理:引物是人工合成的两段寡核苷酸序列,一个引物与目的基因一端的一条DNA模板链互补,另一个引物与目的基因另一端的另一条DNA模板链互补。

在PCR(聚合酶链式反应)技术中,已知一段目的基因的核苷酸序列,根据这一序列合成引物,利用PCR扩增技术,目的基因DNA受热变性后解链为单链,引物与单链相应互补序列结合,然后在DNA聚合酶作用下进行延伸,如此重复循环,延伸后得到的产物同样可以和引物结合。

pcr技术引物的作用有哪些方面

一小段寡聚的DNA,一般有两个(一对),分为上游引物和下游引物,分别指导DNA两条链的聚合。它们主要作用有两个,一个是和模板特异性结合来指导taq聚合酶合成所要的片段。一个是提供一个3‘端的-OH末端,只有拥有一个-OH末端,DNA聚合酶才能合成DNA。

在体内是由小段的RNA来提供的,在体外PCR试验中则用DNA,因为DNA比RNA稳定易于储存。

pcr技术引物的作用有哪些特点

引物的功能是作为核苷酸聚合的起始点,引导DNA的合成。

能设定循环次数,及控制复制次数。PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。一般的循环次数选在30~40次之间,循环次数越多,非特异性产物的量亦随之增多。

pcr的引物有什么作用

不相同,而且是从根本上就不同,即序列不同。pcr扩增是一段目的基因,”目的“的意思就是指定的序列,指定的方法就是前后各用一条引物定位。所以两条引物一般称为”上游引物“和”下游引物“。两引物分别对应不同的序列,中间就是需要扩增的部分。

PCR中引物的作用

引物(Primer)在聚合作用的起始时,可以刺激合成另一种大分子,并与反应物以共价键形式连接的序列。在核酸化学中,引物是一段短的单链RNA或DNA片段,可结合在核酸链上与之互补的区域,其功能是作为核苷酸聚合作用的起始点,核酸聚合酶可由其3′端开始合成新的核酸链。体外人工设计的引物被广泛用于聚合酶链反应、测序和探针合成等。

自然中存在有生物的DNA复制引物(RNA引物)和聚合酶链式反应(PCR)中人工合成的引物(通常为DNA引物)。一般所说引物,指DNA引物,以下简称引物。

上游引物:DNA分子两端不一样,因为核苷酸分子不是对称的,5'位有个磷酸,3'位是-OH就是:磷酸端和羟基端。DNA复制总是从5’端到3’端,因为DNA聚合酶只能往3’端加核苷酸。所以谁先复制谁上游,往后的就是下游,上游下游是个相对概念,是某一个序列/碱基相对于另一个序列/碱基而言。上游引物是靠近5'端的,下游引物是靠近3‘端的。

DNA是双链,两个链是反向平行的,DNA聚合酶顺着其中一个链走,这个链就是负链,另一个链是反着一段一段复制的,这个是正链。

pcr技术中引物的作用

一般都是一对引物,扩增一个片段用。还有些特殊的pcr需要用到3-5条引物,还有多重PCR可以在一个反应中扩增多条片段,几条就几对。

引物是一段短的单链RNA或DNA片段,可结合在核酸链上与之互补的区域,其功能是作为核苷酸聚合作用的起始点,核酸聚合酶可由其3′端开始合成新的核酸链。体外人工设计的引物被广泛用于聚合酶链反应、测序和探针合成等。

引物是人工合成的两段寡核苷酸序列,一个引物与感兴趣区域一端的一条DNA模板链互补,另一个引物与感兴趣区域另一端的另一条DNA模板链互补。

pcr技术中引物的作用是什么

PCR引物又称为寡核苷酸引物,也就是RNA,是由人工合成的,分为两种,引物1和引物2。由于DNA聚合酶只能从核苷酸链的5'端到3'端进行复制,也就是只能识别3'的尾端,而且只能把核苷酸连到已经和DNA模板互补产生的多核苷酸链上,所以引物1和2分别于双链DNA的两条链的尾部(就是末尾是3'端的那一边)结合,为那些脱氧核苷酸提供3'的末端,就相当于开了个头。然后在DNA聚合酶的作用下合成两条新链。而那段引物就成了新链的一部分。其实在生物体内的DNA复制也是这样的一个过程,只是引物是人体自身合成的。

pcr技术引物的作用是什么

引物可以做为DNA复制开始时DNA聚合酶的结合位点,在细胞外的条件下,只有通过引物,DNA才可以开始进行复制。引物是已知序列的DNA小片段。

pcr技术引物有几种

PCR 反应体系主要由寡核苷酸(引物)、4 种dNTP、Taq DNA 聚合酶、靶序列DNA 和PCR 反应缓冲液体系组成。

设计PCR 引物时的一般原则

(1)引物长度- 一般15~ 30碱基,过短则特异性低; 过长则会引起引物间的退火而影响有

效扩增。

(2) 避免内部二级结构,避免序列内有较长的回文结构,使引物自身不能形成发夹结构。

(3) G/C 和A/T 碱基均匀分布,G/C 含量在45%~ 55% 之间,引物碱基序列尽可能选

择碱基随机分布,避免嘌呤、嘧啶的连续排列。

(4) 要避免两个引物间特别是3' 末端DNA 序列互补以及同一引物自身3' 末端的序列互

补,使它们不能形成引物二聚体或发卡结构。

(5) 引物3' 端碱基一般应与模板严格配对,并且3' 端为G、C 或T 时引发效率较高。

(6) 引物5' 端碱基可不与模板匹配,可添加与模板无关的序列(如限制性内切酶的识别

位点、ATG 起始密码子或启动子序列等)。这些与原初模板并不配对的非互补序列在后续的循

不中将被带到双链DNA 中去,这样反应产物不仅含有目的序列,同时在目的基因两侧又有了

的限制酶切位点,用相应的限制酶切割后即可将PCR 产物定向克隆到载体中。

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