pcr反应体系中Mg的作用(pcr中mg2+作用)
pcr中mg2+作用
1.化学本质都是蛋白质,
2.合成位置一般都在核糖体内.
3.作用：
解旋酶：就是作用DNA的,一般用在PCR技术中来打开一些DNA的二级结构.例如一些发卡结构,有利用DNA的复制.
DNA聚合酶：在PCR过程中,以DNA或cDNA为模板,以引物,dNTP,Mg2+等试剂为原料复制DNA所用到的一种不可或缺的酶.
RNA聚合酶和DNA聚合酶一样,只是他是用来复制RNA的.
逆转录酶：以RNA为模板,把RNA转变为单链的cDNA.以利于后续的DNA克隆以及文库构建.
限制酶：就是通常所说的限制性内切酶,不同酶的作用位点不一样切断DNA,一般用于分子克隆与载体构建等基因工程技术.
DNA边接酶：就是将限制性内切酶切断的DNA片断又重新连接成一条DNA.连接的DNA片断一定是同一个限制性内切酶切割产生同样粘端的片段,或者是不同酶切割产生平端的片段,但是这样的连接效率一般较低.
4.这些酶一般通过克隆,表达获得.存在不同生物体内.
pcr mgcl2
Mix是即用型的常规PCR预混合溶液，含有Taq DNA Polymerase、dNTP混合物、MgCl2以及优化的缓冲体系，它以2×的浓度形式存在，反应时只需加入所需引物和模板，用水稀释即可立刻配制完PCR体系。
pcr中mg的作用
ddH2O17.5μL
10×Taq reaction buffer2.5μL
dNTP（2.5mM）1μL
P1（10μM）1μL
P2（10μM）1μL
基因组DNA1μL
Taq DNA polymerase（2.5U/μL）1μL
Total Vol.25μL你的PCR反应体系中没有加MgCl2吗？Mg2+在PCR反应中发挥了重要作用，Mg2+浓度越高，Taq酶活性越强，条带越亮，但非特异性也较强，杂带越多；Mg2+浓度过低则影响PCR扩增产量，甚至使PCR扩增失败而没有扩增条带。那个拖尾可能是引物二聚体
pcrmg2+
拖尾在生物专业词汇叫做smear。造成此的原因有许多种。一般来讲，有以下几点：
1，引物设计不佳，造成了拖尾现象。
2，PCR中DNA浓度加的太多，造成了拖尾。
3，mg2+浓度加的太高，造成了拖尾。
4，跑胶电压不合适，造成了拖尾。
5，退火温度不合适，造成了拖尾。
mg离子在pcr中的作用
PCR反应需要加镁离子，并且镁离子浓度的总量应该比dNTPs的浓度高，常用1.5mmol/L。 镁离子是加在PCR反应的缓冲液中的，成分是最复杂的，除水外一般包括四个有效成分：
1、缓冲体系，一般使用HEPES或MOPS缓冲体系；
2、一价阳离子，一般采用钾离子，但在特殊情况下也可使用铵根离子；
3、二价阳离子，即镁离子，根据反应体系确定，除特殊情况外不需调整；
4、辅助成分，常见的有DMSO、甘油等，主要用来保持酶的活性和帮助DNA解除缠绕结构。 缓冲液的目的是提供合适的酸碱度与某些离子，而PCR反应五要素是：引物(PCR引物为DNA片段，细胞内DNA复制的引物为一段RNA链）、酶、dNTP、模板和缓冲液（其中需要Mg2+）。
在一般的pcr反应中,mg2+浓度为
PCR反应需要加镁离子，并且镁离子浓度的总量应该比dNTPs的浓度高，常用1.5mmol/L。 镁离子是加在PCR反应的缓冲液中的，成分是最复杂的，除水外一般包括四个有效成分：
1、缓冲体系，一般使用HEPES或MOPS缓冲体系；
2、一价阳离子，一般采用钾离子，但在特殊情况下也可使用铵根离子；
3、二价阳离子，即镁离子，根据反应体系确定，除特殊情况外不需调整；
4、辅助成分，常见的有DMSO、甘油等，主要用来保持酶的活性和帮助DNA解除缠绕结构。 缓冲液的目的是提供合适的酸碱度与某些离子，而PCR反应五要素是：引物(PCR引物为DNA片段，细胞内DNA复制的引物为一段RNA链）、酶、dNTP、模板和缓冲液（其中需要Mg2+）。
pcr中mg离子的作用
PCR反应需要加镁离子，并且镁离子浓度的总量应该比dNTPs的浓度高，常用1.5mmol/L。
镁离子是加在PCR反应的缓冲液中的，成分是最复杂的，除水外一般包括四个有效成分：
1、缓冲体系，一般使用HEPES或MOPS缓冲体系；
2、一价阳离子，一般采用钾离子，但在特殊情况下也可使用铵根离子；
3、二价阳离子，即镁离子，根据反应体系确定，除特殊情况外不需调整；
4、辅助成分，常见的有DMSO、甘油等，主要用来保持酶的活性和帮助DNA解除缠绕结构。
缓冲液的目的是提供合适的酸碱度与某些离子，而PCR反应五要素是：引物(PCR引物为DNA片段，细胞内DNA复制的引物为一段RNA链）、酶、dNTP、模板和缓冲液（其中需要Mg2+）。
pcr反应体系中mg2+的作用是什么
PCR
以拟扩增的DNA分子为模板，以一对分别与模板5′-末端和3′-末端相互补的寡核苷酸片段为引物，
过程
在DNA聚合酶的作用下，按照半保留复制的机制沿着模板链延伸，直至完成新的DNA合成，重复这一过程，即可使目的DNA片段得到扩增。组成PCR反应体系的基本成分包括：模板DNA、特异性引物、DNA聚合酶、dNTP以及含有Mg2+的缓冲液。
pcr中mgcl2的作用
1. 引物的质量是保证PCR特异性的关键，引物过长或过短均会使特异性降低，以18～30bp为宜；引物中C+G含量宜在50%左右；引物内部和引物之间不应含有互补序列；引物的碱基顺序与非扩增区域的同源性应小于70%；引物的3’末端与模板DNA一定要配对，但末端没有严格的限制，故引物设计时可在5’末端加上限制性内切酶位点和/或启动密码ATG等；引物合成后必须纯化以去除合成产物中的不完整序列、脱嘌呤产物、碱基修饰链等“杂质”；引物的终浓度一般为0.2～0.5μmol/L，过低会影响反应产量，过高会增加引物二聚或错配的几率。
2. Taq DNA聚合酶具有5’→3’聚合酶活性和5’→3’外切酶活性，但无3’-5’外切酶活性，因此对单核苷酸的错配无校正功能，发生碱基错配的几率为 2.1×10-4左右。然而Taq DNA聚合酶的优势在于反应产量高于其他DNA聚合酶。Stratagene推出的Pfu DNA聚合酶一直是研究人员心目中最好的高保真酶，而Pfu DNA聚合酶经基因工程改造后，新创出的Pfu Ultra具有更佳的校验活力。数据显示Pfu UltraTM高保真DNA聚合酶的平均错配率为Pfu DNA聚合酶的1/3，为Taq DNA聚合酶的1/18，是目前保真度最高的PCR酶(保真度＝1/错误率) (数据来源：美国冷泉港实验室)。
3. Mg2+浓度也是影响反应效率和特异性的重要因素之一。Taq DNA聚合酶对Mg2+浓度非常敏感，Mg2+可与模板DNA、引物及dNTP等的磷酸根结合，不同反应体系中应适当调整MgCl2的浓度，一般以比 dNTP总浓度高出0.5～1.0mmol/L为宜，Mg2+过量能增加非特异扩增。
4. dNTP的浓度过高会增加碱基的错误掺入率，使反应特异性下降；过低则会导致反应速度下降。使用时4种dNTP必须以等当量浓度配制，均衡的dNTP有利于减少错配误差和提高使用效率。
5. 温度循环参数中应特别注意复性温度，它决定引物与模板的特异性结合。退火复性温度可根据引物的长度，通过Tm＝4(G+C)+2(A+T) 计算得到。在Tm允许的范围内，选择较高的退火温度可大大减少引物与模板之间的非特异结合。
6. 减低污染的常规措施：①将PCR试剂、PCR产物及其他分子生物学试剂分开放置；②应保持样品制备、PCR反应液配制与PCR产物分析三个工作区的独立性；③使用阳性和阴性对照；④使用最高质量的水配制PCR实验的所有反应试剂；⑤配制好的PCR反应试剂应分成小包装储存，每个包装仅用于单次实验；⑥制备样品、配制试剂及反应液时必须戴手套；⑦实验前一定要认真清洁加样器等。
pcr中加mg是为什么
是将待扩增的DNA模板加热变性，与其两侧互补的寡聚核苷酸引物复性，然后经过耐热的DNA聚合酶延伸。再进入下一轮变性—复性—延伸的循环，n次循环后DNA可被扩增（1+X）n倍。其中<25nt的引物退火温度Tm=2（A+T）+4（G+C）。
3．器材
旋涡混合器，微量移液取样器，
移液器
吸头，0.2ml PCR微量管，双面微量离心管架，PCR仪，台式离心机，
琼脂
糖凝胶电泳系统，水漂，
恒温
水浴。
4．
试剂
5U/μl Taq DNA聚合酶，PCR缓冲液（10×，MgCl2 free），25mM MgCl2，dNTP，引物，模板质粒pBS-CHI，无菌ddH2O。