亲水作用液相色谱(亲水色谱法)

亲水色谱法

液相色谱有正相和反相之分。正相色谱和反相色谱还有吸附色谱和极性化学键键合色谱之分。

如果采用固定相的极性大于流动相的极性，就称为正相色谱；

如果固定相的极性小于流动相的极性，则称为反相色谱。

在液质联用中，一般均使用极性溶剂进行洗脱。反相色谱中洗脱强度顺序为：水<甲醇<乙腈<乙醇≈丙酮，亲水作用色谱中洗脱强度顺序为：丙酮<乙腈<乙醇<甲醇<水。通常可以通过改变流动相的溶剂强度和类型来改善化合物的保留和选择性。

亲水液相色谱

液相色谱有正相和反相之分。正相色谱和反相色谱还有吸附色谱和极性化学键键合色谱之分。如果采用固定相的极性大于流动相的极性，就称为正相色谱；如果固定相的极性小于流动相的极性，则称为反相色谱。

在液质联用中，一般均使用极性溶剂进行洗脱。反相色谱中洗脱强度顺序为：水<甲醇<乙腈<乙醇≈丙酮，亲水作用色谱中洗脱强度顺序为：丙酮<乙腈<乙醇<甲醇<水。通常可以通过改变流动相的溶剂强度和类型来改善化合物的保留和选择性。

亲水作用色谱

氨基柱-XB-NH2液相色谱柱,其固定相是以超纯全多孔球形硅胶为基质,通过采用独有的固定相键合技术,使用含有氨基丙基官能团的有机硅烷键合而成,能比硅胶柱更快达到平衡,对流动相的水含量没有硅胶柱敏感。

XB -NH2适用于大多数正相色谱的应用,还可作为HILIC亲水作用色谱的固定相,

亲水作用色谱分离技术

亲水色谱疏水色谱的区别：

疏水作用层析（Hydrophobic Interaction Chromatography，HIC）是根据分子表面疏水性差别来分离蛋白质和多肽等生物大分子的一种较为常用的方法。蛋白质和多肽等生物大分子的表面常常暴露着一些疏水性基团，我们把这些疏水性基团称为疏水补丁，疏水补丁可以与疏水性层析介质发生疏水性相互作用而结合。不同的分子由于疏水性不同，它们与疏水性层析介质之间的疏水性作用力强弱不同，疏水作用层析就是依据这一原理分离纯化蛋白质和多肽等生物大分子的。

反向液相色谱RPC

一般用非极性固定相（如C18、C8）；流动相为水或缓冲液，常加入甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等与水互溶的有机溶剂以调节保留时间。它是根据被测组分离子与离子对试剂离子形成中性的离子对化合物后，在非极性固定相中溶解度增大，从而使其分离效果改善。

疏水作用层析：溶液配置简单，性状温和，能保持蛋白活性，但操作复杂，分离效率低。

亲水作用色谱柱

做高效液相色谱实验前要根据化合物的结构来确定液相分离模式，不是说反相液相对所有的都能进行分析。要用反相的话，在色谱柱能承受的ph范围内，可考虑调整流动相的ph来抑制化合物的离子化，增大疏水作用。极性大的，比较好的方法是采用亲水色谱作用模式。

亲水相互作用色谱

分离原理：

C18色谱柱是一款应用非常广泛的反相色谱柱，因为它对化合物分离的作用力单一，所以我们可以在出峰时间上判断化合物的极性大小。

C18在反相条件下基本上适合绝大部分物质。通过改变硅胶孔径，材质或者修饰C18（嵌入亲水基团，侧链屏蔽，在硅胶表面带电，杂化等）或者改变碳载量，在方法上改进（衍生），让它在小分子化合物的分离都有很大的优势。大极性，中等极性，小极性，都是可以实现分离。

亲水液相色谱柱有哪些

优先选择HILIC色谱柱，AQ色谱柱只是在反相填料基础上增强对极性分子的保留，但改善效果有限，而HILIC则是基于亲水作用的分离机理，使得大极性物质也可以在色谱柱上保留。

亲水柱色谱柱

色谱柱的型号有很多，但是不外乎以下几种：

1.正向（硅胶、氨基、腈基）、反向柱（ODS、C8、C4）

2.凝胶柱（分子筛作用）

3.手性柱（拆分异构体）

4.Hilic（高极性亲水柱）流动相：水、甲醇、乙腈。PE、EA等，并且包含缓冲盐溶液其他：色谱柱填料颗粒大小，柱温、流速上面的是分离的色谱条件，如果只是任意的两种待测物，那么理论上应该可以通过实验排列组合以上因素获得待测物质的基线分离。