丝裂霉素c作用于细胞(丝裂霉素c的抗癌作用机制是)
丝裂霉素c的抗癌作用机制是
探讨腺病毒介导的肿瘤抗原基因修饰的树突状细胞(DC)体内免疫后对抗原特异性抗肿瘤免疫反应的诱导作用。
方法：以β-gal为模拟抗原，以转染有LacZ基因并稳定表达β-gal的淋巴瘤细胞E22为肿瘤细胞模型，用携带编码β-gal的LacZ基因的重组腺病毒载体(AdLacZ)转染小鼠骨髓DC，检测转染的效率及LacZ基因修饰DC刺激T细胞增殖的能力，观察皮下免疫LacZ基因修饰DC后小鼠引流区淋巴结细胞数量和组分的变化以及诱导产生CTL和抵抗E22细胞再攻击的能力。结果：LacZ基因修饰后24、48、72 h，均能检测到80％以上的DC表达β-gal，此基因修饰的DC可有效刺激同基因型小鼠脾脏T淋巴细胞增殖反应；将其皮下免疫小鼠1 w 后再接种E22细胞，小鼠的存活期较其他DC免疫小鼠显著延长，但对B16黑色素瘤细胞的攻击无免疫保护作用。此外，LacZ基因修饰的DC免疫小鼠的引流淋巴结细胞数量显著增加，且产生了针对E22的而非EL-4或B16的特异性CTL。结论：腺病毒介导的肿瘤抗原基因修饰的DC能有效诱导机体产生特异的抗肿瘤免疫反应。树突状细胞(Dendritic cells,DC)是目前所知的是功能最强的、也是唯一能激活初始性T细胞(Nat-ive T cell) 的专职抗原提呈细胞(Antigen-presenting cell,APC)，在免疫应答中处于中心地位。近年来体外大量扩增DC的方法日益成熟，使DC用于肿瘤治疗受到重视［1，2］。Porgador 等用MHC I类分子限制的肿瘤抗原多肽体外致敏的DC免疫小鼠，不但诱导产生了特异性CTL，同时也使小鼠获得了抵抗肿瘤再攻击的能力［3，4］。本室曾用GM-CSF基因修饰的DC经肿瘤抗原体外致敏后或与肿瘤细胞融合后免疫小鼠，使小鼠产生了更强的特异性抗肿瘤免疫反应［5，6］。若将肿瘤抗原基因转染至DC并使之持续表达，有可能更有效地发挥DC的抗原提呈作用，而诱导机体产生特异性抗肿瘤免疫应答。Chen等曾以LacZ基因作为模拟的抗原基因、以其表达产物β-半乳糖苷酶(β-gal)作为模拟的抗原并以转染了LacZ基因、能稳定表达β-gal的胸腺淋巴瘤细胞EL-4的亚克隆E22为模型研究抗原特异性抗肿瘤免疫反应［7］，鉴于将β-gal为模拟抗原的实验体系稳定、简便、明确，因此，我们利用E22为肿瘤细胞模型，通过携带有编码LacZ基因的重组腺病毒载体(AdLacZ)的介导，探讨腺病毒介导的抗原基因修饰的DC能否诱导机体产生特异性抗肿瘤免疫反应，为以DC为基础的肿瘤主动性免疫基因治疗提供实验依据。DC刺激同基因型小鼠T细胞增殖能力的检测 经上述基因修饰的DC，加入丝裂霉素C，终浓度为25 μg/ml，于34℃孵箱中孵育45 min，洗2次，作为刺激细胞。取经灭活E22细胞免疫1 w后的C57BL/6小鼠的脾脏，制成单细胞悬液，Tris-NH4Cl溶去红细胞，洗2次后注入尼龙毛柱，置37℃孵育1 h，预热的PBS(37℃)冲洗出非粘附细胞，作为T细胞即反应细胞。将DC与T细胞按1∶100、1∶330、1∶1 000的比例在96孔培养板上培养72 h，于结束培养前16 h加入3H-TdR(1 μCi/孔)，常规收集细胞，置WALLAC1409液闪仪上检测，计算cpm值。1.6 DC免疫的小鼠引流区淋巴结细胞数量的变化及组分的FACS分析 DC免疫1 w后，取小鼠右后腹股沟浅淋巴结，制备成单细胞悬液，细胞总计数，并用大鼠抗小鼠CD3-PE、CD4-PE、CD8-PE、NK1.1-PE、33D1单抗于4℃标记30 min后洗2次，对于需间接标记的33D1样本管，加入FITC-羊抗大鼠单抗，4℃标记30 min后洗2次，流式细胞仪(FACS Calibur,BD)检测细胞表型，分析淋巴细胞组分。1.7 CTL的体外诱导及杀伤活性的检测 DC免疫7 d后取脾脏T细胞(5×106 ml-1)与灭活的E22细胞按20∶1的比例，在含IL-2 100 U/ml的RPMI 1640完全培养基中培养，第5天收集活细胞作为效应细胞，Na251CrO4标记1 h的E22或EL-4或B16细胞作为靶细胞，以100∶1、50∶1、25∶1不同的效靶比，用51Cr 4 h释放法检测CTL的活性，同时设最大释放组和自然释放组。以下式计算杀伤率： 1.8 DC免疫后的保护作用 于DC免疫1 w后，皮下接种E22细胞(2×107/只)或B16(1×105/只)，每组10只，观察小鼠的存活期。2 结果 2.1 腺病毒介导的LacZ基因修饰DC的效率 X-gal染色表明，腺病毒介导的LacZ基因修饰后24、48、72 h，80%以上DC细胞蓝染；而对照组即没有用LacZ转染的DC，不见细胞着色，表明腺病毒能有效介导模拟抗原β-gal基因转染至DC。2.2 LacZ基因修饰DC的抗原提呈能力 如图1所示，LacZ基因修饰DC刺激同基因型鼠脾脏T细胞的增殖水平明显高于未用LacZ基因修饰的DC和对照腺病毒Ad5感染的DC(P＜0.05)。人类肿瘤抗原以及肿瘤抗原基因的发现与确认，对肿瘤的免疫治疗尤其是主动性免疫治疗提供了新的手段，如抗原基因免疫等对机体就具有一定的免疫保护作用；进一步研究表明，抗原基因免疫尽管能诱导机体产生一定程度的抗肿瘤免疫反应，但其效果仍不能令人满意［9］。将肿瘤抗原与抗原提呈细胞(主要是DC)相结合，通过DC对肿瘤抗原的高效提呈作用激发机体的特异性抗肿瘤免疫反应是肿瘤免疫治疗研究方面的热门课题。目前多用体外抗原致敏的DC免疫机体以诱导产生抗原特异性的抗肿瘤免疫反应，致敏DC的方法多用外源性肿瘤抗原，如肿瘤抗原多肽、肿瘤冻融抗原、肿瘤抗原蛋白等。本研究以β-gal作为模拟抗原，探讨抗原基因修饰的DC对机体特异性免疫反应的诱导作用，可为肿瘤的免疫治疗提供新的途径。实验结果显示，AdLacZ可以高效转染DC，并可持续表达β-gal。用AdLacZ转染的DC免疫的小鼠，其引流区淋巴结细胞数显著高于非转染组，提示DC已迁移至淋巴结并激活了免疫细胞，使其发生了增殖。体外的混合淋巴细胞反应的结果显示，LacZ基因修饰的DC可以刺激E22细胞(表达β-gal)免疫小鼠的脾脏T细胞明显增殖，其刺激活性显著高于未用LacZ基因修饰的DC，提示LacZ基因修饰的DC有效地提高了模拟抗原β-gal。同时用LacZ基因修饰的DC免疫小鼠后，可以诱导产生较高水平的E22特异性CTL杀伤活性，而对EL-4细胞和B16细胞无杀伤活性，证实了LacZ基因修饰DC后，DC提呈了模拟抗原(β-gal)，诱导产生了针对模拟抗原——β-gal的特异性免疫反应。用LacZ基因修饰的DC免疫的小鼠，可抵抗野生型E22细胞的再攻击，而不能使接种B16的小鼠的存活期延长，说明LacZ基因修饰DC的免疫使小鼠获得了特异的抵抗E22肿瘤细胞的免疫保护力。上述结果提示，用携带编码肿瘤抗原基因的腺病毒作为载体转染DC，不但可以使DC得到高效转染，而且可持续表达该抗原，使抗原在DC内得到有效加工处理，以多个抗原表位提呈给T细胞，用其免疫后可以使机体产生显著的特异性抗肿瘤免疫反应。研究结果也表明，将APC与肿瘤抗原及其基因结合起来用于肿瘤的主动特异性免疫治疗，具有一定的临床应用前景，而加强对DC等APC生物学特性和功能的研究以及发现更多的肿瘤抗原及其基因将为此奠定理论基础，具有重要的应用价值。此外，由于人们也发现一些肿瘤具有共享抗原(Shared antigen)的现象，因此构建一种表达肿瘤抗原或其多肽的腺病毒载体有可能会适用于多种肿瘤的治疗，该方面值得深入研究。
丝裂霉素C结构
这种药物是国内外常用的抗肿瘤药物，它对许多实体瘤，特别是胃肠道肿瘤有很好的抵抗作用。丝裂霉素在细胞中被还原酶激活，作用于DNA，对抗DNA复制并解聚DNA。高浓度丝裂霉素可抑制RNA和蛋白质的合成，一般用于治疗胃癌、结直肠癌、肺癌、宫颈癌、膀胱癌等胃肠道肿瘤。
丝裂霉素c的抗癌作用机制是什么
MEF 全称 Mouse Embryonic Fibroblast 是典型的梭状成纤维细胞.实验室取MEF细胞一般是用13.5天的胚胎.
MEF经过伽马射线处理或者丝裂霉素C处理之后的细胞,称为滋养层细胞,Feeder,用于干细胞培养,也有无需Feeder的干细胞系.
MEF本身是作为小鼠iPS诱导的起始细胞或者叫做原材料吧,但是做iPS使用的MEF不会是普通C57小鼠的,都是带有报告基因的转基因或者Knock-in小鼠.
丝裂霉素常用于治疗什么癌症
一）β-内酰胺类：青霉素类和头孢菌素类的分子结构中含有β-内酰胺环。近年来又有较大发展，如硫酶素类（thienamycins）、单内酰环类(monobactams)，β-内酰酶抑制剂(β-lactamadeinhibitors)、甲氧青霉素类(methoxypeniciuins)等。
（二）氨基糖甙类：包括链霉素、庆大霉素、卡那霉素、妥布霉素、丁胺卡那霉素、新霉素、核糖霉素、小诺霉素、阿斯霉素等。
（三）四环素类：包括四环素、土霉素、金霉素及强力霉素等。
（四）氯霉素类：包括氯霉素、甲砜霉素等。
（五）大环内脂类：临床常用的有红霉素、白霉素、无味红霉素、乙酰螺旋霉素、麦迪霉素、交沙霉素等、阿奇霉素。
（六）作用于G+细菌的其它抗生素，如林可霉素、氯林可霉素、万古霉素、杆菌肽等。
（七）作用于G菌的其它抗生素，如多粘菌素、磷霉素、卷霉素、环丝氨酸、利福平等。
（八）抗真菌抗生素：如灰黄霉素。
（九）抗肿瘤抗生素：如丝裂霉素、放线菌素D、博莱霉素、阿霉素等。
（十）具有免疫抑制作用的抗生素如环孢霉素。
丝裂霉素的抗菌机制是
高危险药品是指药理作用显著且迅速、易危害人体的药品。包括高浓度电解质制剂、肌肉松弛剂及细胞毒化药品等 10%KCL溶液、10%NaCl溶液、25%硫酸镁注射液、氯化钙注射液、胰岛素制剂、维库溴铵、阿曲库铵、琥珀胆碱、环磷酰胺、异环磷酰胺、尼莫司汀、甲氨喋呤、氟尿嘧啶、替加氟、替加氟尿嘧啶、阿糖胞苷、卡莫氟、羟基脲、吉西他滨、卡培他滨、放线菌素D、丝裂霉素、平阳霉素、柔红霉素、多柔比星、表柔比星、吡柔比星、羟基喜树碱、长春新碱、长春地辛、长春瑞滨、依托泊苷、替尼泊苷、紫杉醇、多西他赛、他莫昔芬、来曲唑、甲羟孕酮、氟他胺、曲普瑞林、顺铂、卡铂、奥沙利铂、亚砷酸、亚叶酸钙、肝素钠、胺碘酮、氨茶碱、注射用重组人组织纤维蛋白溶酶原激活剂（爱通力）、地高辛。求采纳