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质粒上的抗性基因的作用是(质粒中抗性基因的作用)

更新:2022-11-02 22:51编辑:bebe归类:心理健康人气:58

质粒中抗性基因的作用

当然有用,比如:大肠杆菌质粒上抗青霉毒基因,可以作为转基因中的标记基因来使用。

质粒的抗性基因有哪些

质粒中有两个抗性基因,一个是四环素抗性基因和氨卞青霉素抗性基因,如果用酶1来切会破坏两个抗性基因,同时把质粒切成两个片段,所以只能选用酶2,切开一个切口,便于目的基因的插入。  同理,目的基因需要用酶1,左右各形成一个切口,这样才能切下一个目的基因。

质粒通常采用抗生素合成基因

步骤

细菌铺板:让细菌在LB培养基上生长,培养基上为了防止杂菌生长,会加入抗生素,而含有目标质粒的细菌带有抗生素的抗性,能够正常生长,从而保证板子上长出来的会是目标菌落。

挑选菌落:从LB培养基上挑选菌落备用

细菌培养( ):将挑好的菌落放到大肠杆菌培养液当中,并于37摄氏度培养箱中以250rpm摇动8~12h,使大肠杆菌繁殖

裂解抽提:采用细胞裂解的方式,从含目标质粒的大肠杆菌菌液中将质粒提取出来。

用途介绍

这一实验主要用于获取较多的质粒,质粒扩增需要的源头质粒量非常小,1微克的质粒都已经能够满足扩增的需要,这也使得质粒的使用和赠送变得非常容易。质粒的用途往往是用于转染细胞,通过转染的方式让细胞表达质粒中携带的基因,从而研究该基因对应蛋白的性能。在基础细胞生物学研究中起着非常重要的作用。

用途介绍

这一实验主要用于获取较多的质粒,质粒扩增需要的源头质粒量非常小,1微克的质粒都已经能够满足扩增的需要,这也使得质粒的使用和赠送变得非常容易。质粒的用途往往是用于转染细胞,通过转染的方式让细胞表达质粒中携带的基因,从而研究该基因对应蛋白的性能。在基础细胞生物学研究中起着非常重要的作用。

质粒中抗性基因的作用是什么

表达抗性基因只能说明作为载体的质粒成功导入到受体细胞中。但是这个质粒是否是重组质粒就不好说了,很可能它并没有与目的基因成功重组,要视具体情况才能定论。应该是这里有些错误吧。

质粒和基因

因为你在目的基因两端加上了相应的限制酶识别序列~双酶切后可以和质粒进行连接~

重组质粒中抗生素抗性基因的作用

(1)具有较小的分子量。经验表明,为了避免在DNA的纯化过程中发生链的断裂,克隆载体的分子大小最好不要超过10Kb。

pBR322质粒这种小分子量的特点,不仅易于自身DNA的纯化,而且可容纳较大的外源DNA片段;

(2)具有两种抗菌素抗性基因可供作转化子的选择记号,能指示载体或重组DNA分子是否进入宿主细胞以及外源DNA分子是否插入载体分子形成了重组子。

标记基因往往可以赋予宿主细胞一种新的表型,这种转化细胞可明显地区别于非转化细胞。

当我们把一个DNA片段插入到某一个标记基因内时,该基因就失去了相应的功能。

当把这种重组DNA分子转到宿主细胞后,该基因原来赋予的表型也就消失了。

要是仍保留了原来表型的转化细胞,细胞内含有的DNA分子一定不是重组子。

很显然,既要指示外源DNA是否进入了宿主细胞,又要指示载体DNA分子中是否插入了外源DNA片段,那么这种载体必须至少具有两个标记基因。

另外,pBR322质粒载体还具较高的拷贝数,而且经过氯霉素扩增之后,每个细胞中可积累1000~3000个拷贝,这就为重组体DNA的制备提供了极大的方便。

质粒中抗性基因的作用有哪些

一般标记基因的DNA序列是已知的,若选用抗氨苄青霉素基因,则可在目的基因导入后用氨苄青霉素来处理受体细胞,若无异常,则抗氨苄青霉素已合成,说明基因已得到表达。

标记基因的作用在于便于检测目的基因的情况。因为标记基因和目的基因同位于运载体上,要导入都导入,要表达则都会表达。

检测分三种,首先是通过对标记基因的检测,通常用DNA分子杂交技术,来检验标记基因是否成功的导入受体细胞。

或者用分子杂交技术,来看目的基因导入后是否成功转录出信使RNA。

最后可以用抗原-抗体检验,来验证导入基因是否成功表达。扩展资料标记基因就是在导入受体细胞时导入进取的人类的已知作用的基因,目的是为检测目的基因是否成功导入。由于一般都是有"鸟枪法"导入的目的基因,所以成功率并不是很高,目的基因的检测和筛选就显得很有必要。

例如:大肠杆菌的某种质粒具有青霉素抗性基因,当这种质粒与外源DNA组合在一起形成重组质粒,并被转入受体细胞后,就可以根据受体是否吸饱具有青霉素抗性来判断受体细胞是否获得了目的基因。

当含有青霉素的培养基来培养受体细胞时,能够在培养基中存活下来的受体细胞就可以认为是成功的导入了外源DNA,标记基因就起作用了。

基因工程中质粒的作用

质粒在基因工程中是一类重要的载体,其作用主要是携带一些基因片段(可以是编码基因,也可以是调控区等),在细胞内环境中进行表达或参与通路的相互作用,达成人们希望的目的,这些目的一般包括:取得蛋白产物(有直接提取的,也有表达酶进行药物合成的),探究基因相互作用关系(比如过表达某一特定基因观察表型变化)。

总之质粒的作用一句话,将一段属于或者不属于这个物种的基因片段引入细胞/个体环境中。并进行后续研究。

希望能够帮到你~有问题一起讨论解决哦~

质粒的抗性基因是常用的什么标记

抗性基因或标记基因在质粒上是为了检验质粒是否被转入菌体中。

如果你的质粒是已经构建好,而且鉴定正确的,没有空载体质粒,那么,当你转化后,在筛选平板上转化(因为转化不是100%的效率,有些菌是没有质粒转入的),只有转入了该质粒的菌才能长起来,也就意味着这菌是带有你的目的基因.另外,抗性基因和标记基因(如营养缺陷基因)给予菌体以选择压力,有利于质粒在菌体内的大量扩增。

另一种情况,比如你做连接实验,把目的基因片段和酶切质粒连接,这时,连接效率更不会是100%,当你把连接产物转入感受态细菌,只要转入了该质粒(无论是空载体还是阳性载体),菌都能长起来,没转入的就长不起来,起到第一步筛选.要筛选你的阳性克隆,还需进一步检验,比如PCR或者提质粒酶切。

质粒中抗性基因的作用是

由于amp是β内酰胺类抗生素,其作用机理跟kana等抗生素不一样,它的内酰胺环会被质粒amp抗性基因表达的酶切割断裂,从而水解amp,使带抗性基因的细胞得以存活。

对于摇瓶低密度表达,amp的量足够,所以还好。但要是上罐发酵,菌体密度大,加入的amp被水解消耗,可能导致质粒丢失、污染等情况,虽然可以通过补加amp的措施补救,但由于不好监控,且对细胞生长状态以及不同批次的重复性等等都会产生影响,所以不推荐这么干。最方便的就是改质粒抗性。

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