sds在dna提取中的作用(sds提取dna注意事项)

sds提取dna注意事项

原理就是去掉植物细胞壁萊垍頭條

细胞膜垍頭條萊

质体萊垍頭條

线粒体萊垍頭條

叶绿体萊垍頭條

剩下细胞核了。就是DNA了。條萊垍頭

通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞，由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响，在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性。在液氮中研磨，材料易于破碎，并减少研磨过程中各种酶类的作用。萊垍頭條

十二烷基肌酸钠(sarkosyl)、十六烷基三甲基溴化铵(hexadyltrimethyl垍頭條萊

ammomum條萊垍頭

bromide，简称为CTAB)、十二烷基硫酸钠(sodium萊垍頭條

dodecyl萊垍頭條

sulfate，简称SDS)等离子型表面活性剂，能溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，从而使DNA得以游离出来。再加入苯酚和氯仿等有机溶剂，能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸(DNA、RNA)水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。上清液中加入无水乙醇使DNA沉淀，沉淀DNA溶于TE溶液中，即得植物总DNA溶液垍頭條萊

sds方法提取DNA各个试剂作用

药品试剂及耗材： —— 液氮 —— 提取缓 冲液：500 mmol/L NaCl, 100 mmol/L Tris-HCl ph8, 50 mmol/L EDTA ph8，10 mmol/L 2-巯基乙醇（用前加入） ---- 20% SDS ph7.2 ---- 5 mol/L KAc ---- 氯仿：异戊醇（24：1） —— 异丙醇 —— 70%乙醇 —— TE缓冲液 :10 mmol/L Tris-HCl,1 mmol/L EDTA,PH8.0萊垍頭條

sds法提取质粒dna原理

　　质粒DNA提取一般用沸水浴法和碱裂解法，现在一般都采用碱裂解法，并有试剂盒可用。它主要是将细胞内的环状质粒提取出来，一般需要用SDS裂解，RNA酶降解，然后过柱，再进行洗脱.过程比较简单。　　而基因组DNA提取则较为复杂，也需要用SDS裂解和RND酶降解，但降解时间较长，同时对有些革兰氏阳性细菌还要进行溶菌酶处理，最后用氯仿-苯酚进行除蛋白，这一步重复进行多次，在用氯仿除去多余的苯酚，用乙醇清洗烘干后溶于TE缓冲液中。整个过程比提质粒更复杂，耗时也更长。 頭條萊垍

核酸提取sds的作用

SDS（十二烷基苯磺酸钠）是一种阴离子去垢剂，在高温条件下能裂解细胞，使染色体离析、蛋白变性，同时SDS与蛋白质和多糖结合成复合物，释放出核酸。

SDS法提DNA

实验原理1. 离心柱结构：特殊硅基质吸附材料，特异性吸附DNA，而RNA与蛋白质穿过。

在正常情况下，核酸表面覆盖了一层由水分子组成的亲水薄膜，以维持其水溶性。高浓度盐离子的加入破坏了核酸表面亲水薄膜的相对有序排列，形成了疏水环境。在此环境中，核酸与硅胶膜能有效结合，而蛋白质、代谢产物和其他污染物则不能结合。萊垍頭條

2. 碱变性抽提的原理是在pH高于12.6的碱性条件下，染色体DNA的氢键断裂，破坏了碱基配对，导致双螺旋结构解开而变性，但闭环的质粒DNA链由于处于拓扑缠绕状态而不能彼此分开。当pH调至中性时，质粒DNA链迅速恢复到原来构型，仍保存于溶液中。而变性的染色体DNA不能再复性，通过离心，随不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来，使两者得以分离萊垍頭條

sds dna提取

杂质：多酚类、糖类物质较多去除方法：材料粉碎后，在加细胞裂解液前，加入一些缓冲液清洗来除去多糖：缓冲液配比（100mmol/LTris－HCl，pH8.0；100mmol/LEDTA；250mmol/LNaCl；50ug/mL蛋白酶K；1％月桂酸钠Nalauroylsarcosine），50度保温过<Rozman和Komel，1994>，或者只用100mmol/LTris－HCl溶液清洗<李晓波等，2002>。去除多酚成分，可以添加Vc等抗氧化剂（参考浓度30～60mmol/L）<胡春根等，1998>和PVP、PEG等酚的结合剂，防止酚类与DNA的结合。 萊垍頭條

sds法提取植物dna失败的原因

原理：條萊垍頭

要进行重组DNA 实验,就离不开外源基因的纯化,而外源基因主要来源之一就要直接从生物的染色体DNA上制备,所以制备高质量的染色体DNA样品经常为基因工程实验所需要,抽提细菌染色体DNA的方法目前已有许多种,这里所介绍的两种方法：一适用于枯杆菌染色体的抽提；另一种方法则适用于大肠杆菌染色体的制备.萊垍頭條

基因工程实验所需要的基因组DNA 通常要求分子量尽可能大,以此增加外源基因获得率,但要获得大片段的DNA 非易事,细菌基因组DNA通常是个很大的环状态DNA,而在抽提过程中,不可避免的机械剪切力必将切断DNA,如果要抽提到大的DNA 分子,就要尽可能地温和操作,减少剪切力,减少切断DNA 分子的可能性；分子热运动也会减少所抽提到的DNA分子量,所以提取过程也要尽可能在低温下进行.另外细胞内及抽提器皿中污染的核酸酶也会降解制备过程中的DNA,所以制备过程要抑制其核酸酶的活性.萊垍頭條

另外制备的细菌染色体DNA 必须是高纯度的,以满足基因工程中各种酶反应的需要,制备的样品必须没有蛋白污染,没有RNA,各种离子浓度应符合要求,这些在染色体制备时都应考虑到.條萊垍頭

大肠杆菌染色体DNA 抽提首先收集对数生长期的细胞,然后用离子型表面活性剂十二烷基磺酸钠（SDS）破裂细胞,SDS 具有的主要功能是：（1）溶解细胞膜上的脂类和蛋白质,因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜；（2）解聚细胞膜上的脂类和蛋白质,有助于消除染色体DNA上的蛋白质；（3）SDS 能与蛋白质结合成为R1—0—SO3R2—蛋白质的复合物,使蛋白质变性而沉淀下来.但是SDS 能抑制核糖核酸酶的作用,所以在以后的提取过程中,必须把它除干净.以免影响下一步RNase的作用.破细胞后RNA经RNase消化除去,蛋白质经苯酚、氯仿:异戊醇抽提除去经洒精沉淀回收DNA.枯草杆菌染色体制备与上类似,但略加修改的方法要适合教学要求.枯草杆菌是格兰氏阳性菌,所以在SDS 处理前需要使用溶菌酶裂解细胞壁.溶菌酶是一种糖苷水解酶,它能水解菌体细胞壁的主要化学成份肽聚糖中的β—1,4 糖苷键,有助于细胞壁破裂,破裂的细胞壁在SDS 的作用下溶菌,同时用蛋白酶K 消化蛋白质,能解离缠绕在染色体DNA上的蛋白质,然后加入一定量的醋酸钾,使蛋白质变性,通常离心除去,在这期间可加入核糖酸酶消化RNA,最后用乙醇回收DNA.萊垍頭條

此二种方法抽提的细菌染色体DNA,无RNA和蛋白质污染,可用于限制性内切酶消化,分子再克隆等.但在下一步实验前,要测定其DNA的浓度,常用测定DNA 浓度的方法,是溴化乙锭电泳法；当DNA 样品在琼脂糖凝胶中电泳时,加入的EB 会增强发射的荧光.而荧光的强度正比于DNA 的含量,如将已知浓度的标准样品作电泳对照,就可估计出待样品的浓度。萊垍頭條

sds在提取DNA作用机理

植物DNA的提取萊垍頭條

1、目的要求垍頭條萊

学习从新鲜的叶片中提取植物总DNA的方法。萊垍頭條

2、实验原理萊垍頭條

本实验介绍的就是一种快速简便提取植物总DNA的方法：先将新鲜的叶片在液氨中研磨，以机械力破碎细胞壁，然后加入十六烷三甲基溴化铵（简称CBA,是一种阳离子去污剂)分离缓冲液，使细胞膜破裂，同时将核酸与植物多糖等杂质分开。再经氯仿-异戊醇提取去除蛋白，即可得到适合于酶切的DNA。垍頭條萊

3、试剂和器材萊垍頭條

一、试剂條萊垍頭

CTBA抽提缓冲液：2%CTBA.100mmolL Tris-HCl,pH8.0;20mmolL EDTA;1.4molL萊垍頭條

NaCl;0.2%(vv)巯基乙醇共100mL:称取2 g CTBA,8.18 g NaCI,0.74 g EDTA Na22H20,加入10mL1molL的Tris-HCl,pH8.0,0.2mL的巯基乙醇，加水定容至100mL.萊垍頭條

TE:TrisEDTA缓冲液：10mmolL Tris-HCl,pH8.0;1mmolL EDTA。萊垍頭條

异丙醇：乙醇：氯仿一异戊醇(24：1，V:V):液氮。萊垍頭條

二、材料萊垍頭條

新鲜植物叶片。頭條萊垍

三、材萊垍頭條

研钵：离心机：恒温水浴。垍頭條萊

4、操作方法萊垍頭條

1.称取lg新鲜叶片，置于预冷的研钵中，倒入液氮，将叶片研至粉末。條萊垍頭

2.将叶片粉末转入一个30mL离心管中。萊垍頭條

3。加10 mL CTBA抽提缓冲液，轻轻转动离心管使之混匀。于65℃温育10min。加入等体积的氯仿一异戊醇，轻轻颠倒混匀。垍頭條萊

4.室温下4000rmin离心10min,回收上层水相。在回收的上层水相中。頭條萊垍

5。加入23体积预冷的异丙醇（预冷至一20℃），轻轻混匀，置冰箱中放置数小时梦至过夜，使核酸沉淀下来。萊垍頭條

6.室温下4000rmin离心10min。萊垍頭條

7.小心倒去上清液，用80%乙醇洗涤沉淀物.尽量沥干乙醇，置于真空干燥器内干称重，计算产率。萊垍頭條

8.将DNA沉淀溶于1mLTE中。萊垍頭條

sds法提取dna注意事项

DNA的提取方法萊垍頭條

一.酚抽提法：先用蛋酶K、SDS破碎细胞，消化蛋白，然后用酚和酚-氯DNA大小为100-150kb萊垍頭條

二.甲酰胺解聚法：破碎细胞同上，然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合，再透析获得DNA可得DNA200kb左右。萊垍頭條

三.玻璃棒缠绕法：用盐酸胍裂解细胞，将裂解物铺于乙醇上，然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅，DNA沉淀液绕于玻棒。生成DNA约80kb。萊垍頭條

四.异丙醇沉淀法：基本同1法，仅用二倍容积异丙醇替代乙醇，可去除小分子RNA（在异丙醇中可溶状态）條萊垍頭

五.表面活性剂快速制备法：用Triton X-100A或NP40表面活性剂破碎细胞，然后用蛋白酶K或酚去除蛋白，乙醇沉淀或透析。條萊垍頭

六.加热法快速制备：加热96℃-100℃，五分钟，然后离心后取上清，可用于PCR反应。頭條萊垍

七.碱变性快速制备：先用NaOH作用20分钟，再加HCI中和，离心后取上清，含少量DNA。萊垍頭條

sds法提取蛋白质

DNA提取的几种方法

(1).浓盐法

利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同，将二者分离，常用的方法是用1M 氯 纳提取化钠抽提,得到的DNP粘液与含有少量辛醇的 氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间，而DNA位于上层水相中,用2倍体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来.

也可用0.15 MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脱氧核糖蛋白,再按氯仿---异醇法除去蛋白.

两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些.

以稀盐酸溶液提取DNA 时,加入适量去污剂,如SDS可有助于蛋白质与DNA 的分离。在提取过程中为抑制组织中的DNase对DNA 的降解作用,在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂.通常用.15MNaCL,0.015M柠檬钠,并称SSC溶液,提取DNA.

（2）.阴离子去污剂法:

用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可以直接从生物材料中提取DNA .由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取DNA.

（3）.苯酚抽提法:

苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用.用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。离心分层后取出水层，多次重复操作，再合并含DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇沉淀DNA 。此时DNA是十分粘稠的物质，可用玻璃漫漫绕成一团，取出。此法的特点是使提取的DNA保持天然状态 .

（ 4）.水抽提法:

利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去RNA，然后将沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中,离心后收集上清液.在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M.加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌法搅出.然后分别用66% ٠80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥,既得DNA样品.此法提取的DNA中蛋白质含量较高,故一般不用.为除蛋白可将此法加以改良,在提取过程中加入SDS.