白细胞计数稀释液的作用(白细胞计数的稀释液主要成分)

白细胞计数的稀释液主要成分

有限稀释法是一种常用的克隆方法。 将需要再克隆的细胞株自培养孔内吸出并作细胞计数，计出1mL的细胞数。 用HT培养液稀释， 使细胞浓度为50～60个/mL，于96孔培养板中每孔加0.1mL(五六个细胞/孔)。接种2排，剩余细胞悬液用HT培养液作倍比稀释，再接种2排，如此类推，直至使每孔含0.5～1个细胞。培养7～10d后，选择单个克隆生长的阳性孔再一次进行克隆。一般需要如此重复3～5次，直至达100％阳性孔率时即可，以确保抗体由单个克隆所产生。例如： 实验细胞克隆化培养技术—有限稀释法一、实验目的：

1、掌握用有限稀释法进行细胞克隆化培养技术；

2、学会细胞克隆形成的辩观察技能； 3、配合抗体分泌细胞筛选技术，确定抗体分泌细胞。 二、实验原理： 克隆化培养即单细胞培养技术，用有限稀释法进行杂交瘤细胞克隆化培养，可以及时确定阳性杂交瘤细胞株，同时淘汰因发生染色体丢失或抗体的轻、重链基因分离而出现无抗体分泌阴性细胞株。 一般杂交瘤细胞需经过52—3次反复克隆后，才能达到100%细胞阳性率。 该办法亦适用于一般细胞培养中的细胞纯化、突变细胞株的选择，识别和分离。是细胞株的常用方法。 三、实验材料： 杂交瘤细胞、25毫升培养瓶、96孔细胞培养板（天津有机玻璃厂）、移液管（1毫升、5毫升、10毫升）、弯头滴管、倒置显微镜、CO2培养箱、白细胞计数板、计数器、盖玻片、防水笔、RPMI-1640、小牛血清、青链霉素、10毫升刻度离心管，00橡胶塞，饲养细胞（3-6×105/ml、见腹腔细胞的制备）。 四、实验步骤：

1、分装了每孔0.1毫升腹腔细胞的96孔细胞培养板（可提前24小时准备就绪，置CO2培养箱中备用）；

2、自细胞培养瓶中收集长势良好的杂交瘤细胞（亦可自24孔培养板孔中收集），制成悬液。3、按白细胞计数方法准确计得细胞悬液的细胞数，一般在105/毫升左右。 4、取3支10毫升刻度离心管排列在超净工作台试管架上，先用无血清培养基将细胞稀释至103/毫升，再用含15%小牛血清的完全培养基稀释到101/毫升细胞，即每0.1毫升1个细胞。 5、每孔0.1毫升细胞悬液。 6、置37℃5%CO2培养箱，4天后取出观察，并在板盖上打上标记，做好记录并统计结果。 7、继续培养时，则在第4-5天更换1/2培养基，约第7-9天可以收获培养液上清用于检测抗体。并重复检测1-2次。 8、选择单克隆生长孔，生长良好，阳性强者，转移到24孔板再做克隆经培养或扩大培养。 五、实验结果： 实验结果以总细胞孔（如96孔）中出现克隆孔统计出克隆百分率，并可进一步按单细胞孔、双细胞孔、多细胞孔分别计算出百分率。 六、注意事项：

1、注意无菌操作，一旦发现污染（孔）必须及时处理；

2、计数细胞要求准确，稀释量亦要准确，否则将造成一孔多细胞克隆或克隆百分离太低；

3、在计数克隆出现率之前，不宜更换培养液，也不宜强烈振动培养板；

4、做克隆化培养的小牛血清必须是优质血清；

5、若做克隆抗体检测时，特别要保护细胞的生长状况，防止细胞生长不良甚至丢失。 七、说明： 哺乳动物细胞通过分离、稀释接种，培养在适宜于单细胞生长的培养液中，形成细胞克隆。运用这项技术可以制作细胞成活曲线，即在接种相同数量细胞的培养瓶中，加入不同浓度的化学药品，或照以不同剂量的射线，观察其对细胞的听见害程度。由此可以在哺乳类细胞中进行诱变试验及分离突变细胞。

白细胞计数稀释液的作用不包括

对于临床检验学基础，我们最常见到的计算题就是关于血细胞计数的计算，对比掌握每一种血细胞的计数区域与计算公式，能帮助我们更快更好的做对题目。

那么下面我就来为大家一一介绍。

(1)红细胞：红细胞计数的区域是牛鲍计数板的中央大方格内四角和正中五个中方格内的红细胞数。它的计算公式是：N×25/5×10×106×200=N/100×1012其中N是中央大方格内四角和正中五个中方格内的红细胞数，除于5乘以25是为了计算一个大方格的红细胞数，因为一个大方格的体积是0.1µL，乘以10变成1µL，再乘以10的6次方µL转变为L，最后的200是稀释倍数。

(2)白细胞：白细胞计数区域是四角4个大方格内的白细胞总数。它的计算公式是：N/4×10×106×20=N/20×109其中N是四角4个大方格内的白细胞总数，除以4得到的是一个大方格的白细胞数，和红细胞一样乘以10再乘以10的6次方把单位换算成了L，白细胞计数的稀释倍数是20。

(3)嗜酸性粒细胞：嗜酸性粒细胞计数的是2个计数池共10个大方格内的嗜酸性粒细胞数。计算公式：N/10×10×106×20=N/50×109其中N是10个大方格内的嗜酸性粒细胞总数，除以10得到一个大方格的白细胞数，同样乘以10再乘以10的6次方把单位换算成了L，和白细胞稀释倍数相同，嗜酸性粒细胞的稀释倍数也是20。

(4)血小板：血小板计数的区域和红细胞计数区域相同，是中央大方格的四个角及中心5个中方格的血小板总数，计算公式：N×25/5×10×20×106=N×109其中N是中央大方格内四角和正中五个中方格内的血小板数，除于5乘以25是为了计算一个大方格的血小板，同样乘以10再乘以10的6次方把单位换算成了L，稀释倍数是20。

我们可以发现无论是哪一种血细胞计数，我们要算的都是一个大方格的血细胞数量，再进行单位换算把µL转变为L，最后乘以稀释倍数。这样我们只要记住计数区域就可以很容易的把公式推导出来，减轻了我们的记忆负担，可以帮助我们更快更好的做题。

白细胞计数常用稀释液

白细胞计数是1立方毫米内的白细胞个数 这个数应该等于x/4*20*10 x是四角4个大方格内的白细胞总数 20是稀释倍数 10是指血盖片与计数板的实际高度是0.1mm，乘10后则为1mm。整个式子简化完了就是x*50猫的白细胞正常值 我所学的书上给的是5.0~15.0*10^9/L

白细胞计数稀释液常用

小便中的白细胞高，一般都提示患有尿道炎，膀胱炎等尿路感染性疾病。能够消除小便中白细胞的主要方法就是选用抗菌药物进行抗感染治疗，一般连续用药一周左右，就可以使尿路感染性疾病基本治愈，连续用药两周可以达到治愈的目的。多喝水使尿液稀释，也可以减少尿液中的白细胞浓度。

白细胞计数所用的稀释液

稀释液作为血细胞分析仪配套试剂，其主要作用是对血液标本进行稀释；

其主要作用是溶解血液样本中的红细胞，使分析仪能对白细胞进行计数。其主要成分与血红蛋白形成有色衍生物，通过仪器的比色分析系统，测定血红蛋白的含量。同时，由于不同类型的白细胞体积不同，通过仪器的电阻抗法测量体积的原理，对白细胞进行分类。以实现血细胞分析仪对白细胞分类计数和血红蛋白测定的目的。清洗液其主要作用是清洗分析仪器管路中的蛋白质，并维持测定环境的pH。

白细胞稀释液常用的是什么

细胞在血液中大小主要由细胞内外的晶体渗透压决定的，晶体渗透压有吸水的作用，生理盐水和血浆的渗透压基本相同，所以血液中细胞能维持正常形态，但是生理盐水稀释后晶体渗透压降低，水会由细胞外转向细胞内，白细胞肯定要变大。

稀释过多会破裂。生理盐水，是指生理学实验或临床上常用的渗透压与动物或人体血浆的渗透压相等的氯化钠溶液。浓度：用于两栖类动物时是0.67～0.70%，用于哺乳类动物和人体时是0.85～0.9%人们平常点滴用的氯化钠注射液浓度是0.9%,可以当成生理盐水来使用。