碱裂解法溶液作用(碱裂解法各试剂的作用)

碱裂解法各试剂的作用

无内毒素质粒大量提取试剂盒的操作步骤及注意事项

货号 ：D1150

规格 ：10T

保存 ：常温干燥保存，复检期为一年。

试剂盒内容 ：

试剂盒组成D1150-10T

RNase A1ml

内毒素清除剂100ml

溶液 P140ml

溶液 P240ml

溶液 P340ml

结合液120ml

漂洗液15×2ml

洗脱液30ml

吸附柱10个

收集管10个

说明书1份

产品说明 ：

本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，根据离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的 DNA 的原理特异性提取质粒 DNA。 离心吸附柱中采用的硅基质材料能高效、专一地吸附 DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。 内毒素清除剂可最大限度地除去内毒素。从 50-100ml 大肠杆菌LB 培养液中，可快速提取 200-300μg 高纯度高拷贝的质粒 DNA，提取率达 85-90%。使用本试剂盒提取的质粒DNA 纯度高，可直接用于细胞转染等要求较高的实验，以及其他各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接和转化等试验。

使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇， 加入体积请参照瓶体上的标签。 溶液 P1 在使用前先加入 RNaseA （将试剂盒中提供的 RNaseA 全部加入） ，混匀，置于 2-8℃保存。如非指明，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

碱裂解法的临床意义

溶液1：50 mmol/L 葡萄糖，25 mmol/L Tris.Cl (pH8.0)，10mmol/L EDTA (pH8.0)。葡萄糖增稠，使悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部；EDTA 抑制DNase的活性

溶液2：碱液，目的在彻底破坏细胞膜，释放核酸。

溶液3：酸性钾盐溶液，目的是中和碱性并且沉淀SDS同时被沉淀的还有蛋白和大片段线性DNA

简述碱裂解法

Kac是碱裂解法提取质粒dna的时候用的溶液，一方面利用hac/ac-缓冲体系平衡溶液二中naoh的强碱性，使dna复性；萊垍頭條

另一方面，k+与溶液二中的sds（结合到蛋白质上）结合生成微溶性物质，促使体系中的蛋白质以及蛋白质所连接的基因组dna的沉降。萊垍頭條

碱裂解法三种溶液作用

加入裂解液不够，或者菌液离心去除后还有过多残余，导致裂解不充分过度裂解，加入裂解液过多且在加入中和液之前的时间间隔过长，或者加入裂解液后摇晃过于剧烈，导致dna长链断裂洗脱时洗脱液用量过大导致浓度过低，建议加入洗脱液之后静置一段时间再去离心收集

碱裂解法和试剂盒法对比

实验室用公司试剂盒提取质粒，一般采用的是碱裂解法。比如从大肠杆菌的菌液中提取，基本原理是先加入RNA酶，把RNA去掉，然后用碱裂解菌体，用酸平衡，并且SDS和蛋白质结合形成沉淀，顺便把与蛋白结合的基因组DNA沉淀下来。

最后上清中含有质粒DNA，把它过柱洗脱下来溶到水中就完成了质粒的提取。

常规碱裂解法与试剂盒法的区别

质粒抽提

质粒抽提方法即去除 RNA，是将质粒与细菌基因组 DNA分开，去除蛋白质及其它杂质，以得到相对纯净的质粒的方法。

提取质粒DNA的方法有很多种，从提取产量上分可分为微量提取、中量提取、大量提取，从使用仪器上分可分为一般提取和试剂盒方法提取，从具体操作方法分可以分为碱裂解法、煮沸法、牙签法等，各种不同的方法各有其优缺点，根据不同的实验目的可以采用合适的提取方法。

碱裂解液成分

氢氧化钠可以使DNA水解。

氢氧化钠的作用：在碱裂解法中，氢氧化钠的作用原理是使细胞膜由脂双层结构向囊泡化转变，从而使细胞裂解，氢氧化钠的作用既能裂解细胞让细胞内含物释放出来，又是质粒DNA和染色体DNA得以分离的关键。

DNA全称是“脱氧核糖核苷酸”，是一种蛋白质。

NaOH是强碱，可以使蛋白质变性。

蛋白质变性会有许多性质改变，比如颜色、状态等。

碱式裂解法

AA丙烯酸

AAS丙烯酸酯-丙烯酸酯-苯乙烯共聚物

ABFN 偶氮(二)甲酰胺ABN 偶氮(二)异丁腈

ABPS 壬基苯氧基丙烷磺酸钠

B 英文缩写全称

BAA 正丁醛苯胺缩合物

BAC 碱式氯化铝

BACN 新型阻燃剂

BAD 双水杨酸双酚A酯

BAL 2，3-巯(基)丙醇

BBP 邻苯二甲酸丁苄酯

BBS N-叔丁基-乙-苯并噻唑次磺酰胺

BC 叶酸

BCD β－环糊精

BCG 苯顺二醇

BCNU 氯化亚硝脲

BD 丁二烯

BE 丙烯酸乳胶外墙涂料

BEE 苯偶姻乙醚

BFRM 硼纤维增强塑料

BG 丁二醇

BGE 反应性稀释剂

BHA 特丁基-4羟基茴香醚

BHT 二丁基羟基甲苯

BL 丁内酯

BLE 丙酮-二苯胺高温缩合物

BLP 粉末涂料流平剂

碱裂解法的基本原理

碱裂解法的原理是：高PH 的溶液会使细胞壁粕类从而使得DNA和蛋白质变性。

将细菌悬浮液暴露于高pH值的强阴离子洗涤剂中，会使细胞壁破裂，染色体DNA和蛋白质变性，将质粒DNA释放到上清中。

尽管碱性溶剂使碱基配对完全破坏，闭环的质粒DNA双链仍不会彼此分离，这因为它们在拓扑学上是相互缠绕的。只要用碱处理的强度和时间不要太过，当pH值恢复到中性时，DNA双链就会再次形成。

在裂解过程中，细菌蛋白质、破裂的细胞壁和变性的染色体DNA会相互缠绕成大型复合物，后者被十二烷基硫酸盐包盖。当用K+取代Na+时，复合物会从溶液中有效地沉淀下来，离心除去变性剂后，就可以从上清中回收复性的质粒DNA。

在SDS存在的条件下，碱水解是一项非常灵活的技术，它对E. coli的所有菌株都适用，并且其细菌培养物的体积可以从1-500mL以上。

碱裂解法的优缺点

DNA提取主要是CTAB方法，其他的方法还有物理方式如玻璃珠法、超声波法、研磨法、冻融法。