亲水作用色谱(亲水作用色谱名词解释)

亲水作用色谱名词解释

HILIC色谱柱是亲水相互作用色谱柱，其保留模式类似于正相，同时又突破了正相模式的溶剂局限。

　　分离原理：采用反相流动相体系，而按照正相顺序出峰。通过亲水性相互作用，可有效的分离反相色谱柱中因保留能力弱而难分离的强极性化合物。是一种分离机理，而具备这种分离机理的键合相种类非常多。在HILIC中，固定相是极性的，流动相中的水相部分表现为强洗脱溶剂，这与传统的反相色谱法完全相反。

亲水作用色谱分离原理

亲水色谱疏水色谱的区别：

疏水作用层析（Hydrophobic Interaction Chromatography，HIC）是根据分子表面疏水性差别来分离蛋白质和多肽等生物大分子的一种较为常用的方法。蛋白质和多肽等生物大分子的表面常常暴露着一些疏水性基团，我们把这些疏水性基团称为疏水补丁，疏水补丁可以与疏水性层析介质发生疏水性相互作用而结合。不同的分子由于疏水性不同，它们与疏水性层析介质之间的疏水性作用力强弱不同，疏水作用层析就是依据这一原理分离纯化蛋白质和多肽等生物大分子的。

反向液相色谱RPC

一般用非极性固定相（如C18、C8）；流动相为水或缓冲液，常加入甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等与水互溶的有机溶剂以调节保留时间。它是根据被测组分离子与离子对试剂离子形成中性的离子对化合物后，在非极性固定相中溶解度增大，从而使其分离效果改善。

疏水作用层析：溶液配置简单，性状温和，能保持蛋白活性，但操作复杂，分离效率低。

亲水作用色谱原理

亲水作用色谱的流动相是：

在大多数的Hilic分离中，采用的流动相为含有少量水/缓冲液与有机相混合（典型的是乙腈），水的比例为3%-40%之间。

水的比例不低于3%是由于Hilic色谱的保留机理决定的，普遍认为Hilic色谱流动相中的水会被吸附到极性固定相的表面形成水膜，然后分析物在水膜和流动相之间进行液液分配作用，加上极性官能团和固定相之间的氢键作用力，离子官能团之间的静电作用力等，实现被分析物的保留。水膜的作用非常重要，所以Hilic流动相中至少含有3%的水。当水的比例大于40%时，保留一般很弱（k≈0）。

亲水作用色谱英文

优先选择HILIC色谱柱，AQ色谱柱只是在反相填料基础上增强对极性分子的保留，但改善效果有限，而HILIC则是基于亲水作用的分离机理，使得大极性物质也可以在色谱柱上保留。

亲水作用色谱可以使用正相色谱的固定相

1、适合亲水性化合物的分离；

　　2、流动相可以使用100%的水溶液；

　　3、具有与优常规的ODS色谱柱不同的选择性。

亲水作用色谱 实际案例

使用 pacpro 色谱柱为蛋白及其变体的分离提供超高分辨率。基于由 10µm 无孔聚合微球组成的固定相，pacpro 色谱柱可分离差异仅为一个带电残基的异构体。键合的亲水层避免了多余的次级相互作用。

阳离子交换表面提供基于 pH 的选择性控制和快速传质，以实现高效分离和中等容量。

亲水作用色谱中,有机溶剂的含量一般不低于

相似相溶原理。亲水基团是极性的，会溶于极性溶剂水；亲油基团是非极性的，溶于非极性的油。水分子间有较强的氢键，水分子既可以为生成氢键提供氢原子，又因其中氧原子上有孤对电子能接受其它分子提供的氢原子，氢键是水分子间的主要结合力。所以，凡能为生成氢键提供氢或接受氢的溶质分子，均和水“结构相似”。

1、羧酸酯溶剂，如乙酸乙酯，含有非离子表面活性剂的亲水基团，可与水混溶。

2、乙醚、乙醇等由含氧基团组成的醚键和羟基与羧酸酯、嵌段聚醚类物质，它们含有非离子表面活性剂的亲水基（团）。

3、有机酸，如羧酸，磷酸和磺酸。 它们含有阴离子表面活性剂的亲水基团（基团）。

4、具有氨基的有机溶剂，氨基是有机化学中的碱性碱，并且所有含有氨基的有机物质具有一定的碱性特征并且与水相容。