酶作用特异性(酶作用特异性实验与分析)

酶作用特异性实验与分析

根据条件，这应该是一个有关淀粉酶特异性的实验，其目的是证明淀粉是淀粉酶的底物，蔗糖不是淀粉酶的底物。淀粉和蔗糖与斐林试剂都不发生反应。但是，在酶作用最适条件下，如果淀粉经酶促反应水解就会产生还原性产物能与斐林试剂反应。如果蔗糖经过与淀粉一样的实验条件，其反应液能够与斐林试剂反应，说明淀粉酶能催化蔗糖水解，如不能够与斐林试剂反应，说明淀粉酶不能催化蔗糖水解。

理论上，蔗糖不是淀粉酶的作用底物，不能与斐林试剂反应。实验可以证明之。这一酶反应特异性的鉴别反应为什么不用碘液？因为碘液与淀粉显蓝色反应。但是，淀粉完全水解后得到麦芽糖（或少许葡萄糖）遇碘液不显蓝色而是碘色。蔗糖遇碘液也是显碘色。所以，碘液不能区分水解产物，不能说明哪种物质是淀粉酶作用的底物。

另外，如果实验酶活性不能催化淀粉完全水解，只要残存微量淀粉也会显蓝色，影响结果观察。碘液可以用来指示淀粉酶活性的大小。底物淀粉在酶作用最适条件下，其水解程度取决于淀粉酶活性大小，可得到一些不完全的中间产物如蓝色糊精、紫色糊精等，直到最终得到麦芽糖（或少许葡萄糖）。这一系列水解产物分别与碘液显示颜色：蓝色—浅蓝—紫色—碘色。由此反映酶活性大小的差异。

酶作用的特异性实验

冰上操作，充分混匀，控制用量，控制反应时间

冰上操作：使用过程中注意对酶的保护，以免失活

充分混匀：充分混匀才能使酶充分发挥作用

控制用量：过多的酶会导致星活性（比如用限制性内切酶的酶切实验），即酶切错误；PCR中酶加得过多也容易导致非特异扩增

控制反应时间：根据具体的酶、具体的实验确定相应的反应时间

酶的特异性和影响酶作用的因素实验结果

取A B两个试管,A试管中加入1毫升的蔗糖溶液,B试管中加入1毫升的淀粉溶液,分别加入等量的唾液淀粉酶1毫升,将两个试管加入等量的菲林试剂,水浴加热,实验结果为,A试管无颜色,B试管有砖红色沉淀.说明淀粉被唾液淀粉酶分解成还原性糖,而蔗糖没有被分解.证明酶具有专一性~!

附加资料

酶（enzyme）是由活细胞产生的、对其底物具有高度特异性和高度催化效能的蛋白质或RNA。酶的催化作用有赖于酶分子的一级结构及空间结构的完整。若酶分子变性或亚基解聚均可导致酶活性丧失。 酶属生物大分子，分子质量至少在1万以上，大的可达百万。

酶是一类极为重要的生物催化剂（biocatalyst）。由于酶的作用，生物体内的化学反应在极为温和的条件下也能高效和特异地进行。

随着人们对酶分子的结构与功能、酶促反应动力学等研究的深入和发展，逐步形成酶学（enzymology）这一学科。

酶的化学本质是蛋白质（protein）或RNA（Ribonucleic Acid），因此它也具有一级、二级、三级，乃至四级结构。按其分子组成的不同，可分为单纯酶和结合酶。仅含有蛋白质的称为单纯酶；结合酶则由酶蛋白和辅助因子组成。例如，大多数水解酶单纯由蛋白质组成；黄素单核苷酸酶则由酶蛋白和辅助因子组成。结合酶中的酶蛋白为蛋白质部分，辅助因子为非蛋白质部分，只有两者结合成全酶才具有催化活性。

酶的特异性实验总结

首先,引物特异性要好

再,注意操作,避免交叉污染等

1． 在实验过程中要防止 RNA 的降解，保持 RNA 的完整性。在总 RNA 的提取 过程中，注意避免 mRNA 的断裂。

2． 为了防止非特异性扩增，必须设阴性对 照。

3． 内参的设定：主要为了用于靶 RNA 的定量。常用的内参有 G3PD（甘 油醛-3-磷酸脱氢酶）、β-Actin（β-肌动蛋白）等。其目的在于避免 RNA 定量 误差、 加样误差以及各 PCR 反应体系中扩增效率不均一各孔间的温度差等所造成 的误差。

4． PCR 不能进入平台期，出现平台效应与所扩增的目的基因的长 度、序列、二级结构以及目标 DNA 起始的数量有关。故对于每一个目标序列出现 平台效应的循环数， 均应通过单独实验来确定。

5． 防止 DNA 的污染：（1） 采用 DNA 酶处理 RNA 样品。

酶的特异性实验现象和结论

1.在酶促反应中，酶作为高效催化剂，使得反应以极快的速度或在一般情况无法反应的条件下进行。

酶的特异性作用实验结果分析

酶的化学本质是催化剂,全酶是由碳基和葡萄糖组成,温度决定酶的特异性

酶作用的特异性实验结果与分析

酶的三大特性是高效性、专一性、温和性。酶的催化效率比无机催化剂更高，使得反应速率更快；一种酶只能催化一种或一类底物，如蛋白酶只能催化蛋白质水解成多肽；是指酶所催化的化学反应一般是在较温和的条件下进行的。

酶是由活细胞产生的、对其底物具有高度特异性和高度催化效能的蛋白质或RNA。酶的催化作用有赖于酶分子的一级结构及空间结构的完整。若酶分子变性或亚基解聚均可导致酶活性丧失。酶属生物大分子，分子质量至少在1万以上，大的可达百万

酶的特异性实验现象及原因分析

荧光素酶(Luciferase)是自然界中能够产生生物发光的酶的统称，不同的能够控制发光的生物体用不同的荧光素酶来催化不同的发光反应。

萤光生成反应通常分为以下两步：

萤光素+ atp→萤光素化腺苷酸(luciferyladenylate)+ PPi

萤光素化腺苷酸+ O2→氧萤光素+ AMP +光

荧光素酶的基因可以被合成并插入到生物体中或转染到细胞中，将不同类型的细胞(骨髓干细胞、T细胞等)标记上(即表达)荧光素酶，就可以用高敏感度的CCD相机进行对动物体内进行活体观察而不会伤害到动物本身。在荧光素酶中加入正确的萤光素底物就可以放出荧光，而发出的光子可以被光敏感元件，如萤光探测器或改进后的光学显微镜探测到。这就使得对包括感染在内的多种生命活动进程进行观察成为可能。

荧光素酶分析可应用于启动子研究中分析顺式作用元件和反式作用因子、药物筛选、sirna和miRNA筛选、分泌途径及蛋白定位报告基因检测、活细胞的实时动态研究、信号转导通路分析、难转染的细胞(包括干细胞和原代细胞)的研究、RNA剪接研究。

萤光素酶是理想的报告基因，因为哺乳动物细胞中不含内源性萤光素酶，一旦转录完成立刻就生成功能性的萤光素酶。单报告基因实验往往会受到各种实验条件的影响，而双报告基因则通过共转染的“对照”作为内参为试验提供一基准线，从而可以在最大程度上减小细胞活性和转染效率等外在因素对实验的影响，使得数据结果更为可信。Dual-Luciferase®双萤光素酶报告基因检测系统在细胞中同时表达萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶，两者没有种源同源性并对应不同的反应底物，故而没有交叉干扰。得益于超强的光信号和超高的信噪比，本系统被广泛用于miRNA靶基因验证。

转录因子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子，也称为反式作用因子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异序列结合，这些特异性的序列被称为顺式因子，转录因子的DNA结合域和顺式因子实现共价结合，从而对基因的表达起抑制或增强的作用。萤光素酶报告基因实验(luciferase Assay)是检测这类转录因子和其靶启动子中的特异顺序结合的重要手段，其原理简述如下：

(1)用靶启动子的特定片段替换报告基因质粒(如pGL3-basic)的启动子区。

(2)将要检测的转录因子表达质粒与报告基因质粒共转。如果该转录因子能够激活靶启动

酶的特异性实验如何验证了酶的特异性

你问的应该是DNA聚合酶有几种吧？因为TaqDNA聚合酶就是TaqDNA聚合酶，该酶可在离体条件下，以DNA为模板，延伸引物，合成双链DNA。只有5′→3′DNA聚合酶活性和5′→3′的外切酶活性，缺少3′→5′的外切酶活性。而DNA聚合酶按原核细胞和真核细胞分：在原核细胞有DNA聚合酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ。真核细胞中有DNA聚合酶α、β、γ、δ、ε五种，其中δ为主要的聚合酶，γ存在于线粒体中。