dna提取常用试剂及作用是什么(dna提取常用方法有哪些)

dna提取常用方法有哪些

原理：

要进行重组DNA 实验,就离不开外源基因的纯化,而外源基因主要来源之一就要直接从生物的染色体DNA上制备,所以制备高质量的染色体DNA样品经常为基因工程实验所需要,抽提细菌染色体DNA的方法目前已有许多种,这里所介绍的两种方法：一适用于枯杆菌染色体的抽提；另一种方法则适用于大肠杆菌染色体的制备.

基因工程实验所需要的基因组DNA 通常要求分子量尽可能大,以此增加外源基因获得率,但要获得大片段的DNA 非易事,细菌基因组DNA通常是个很大的环状态DNA,而在抽提过程中,不可避免的机械剪切力必将切断DNA,如果要抽提到大的DNA 分子,就要尽可能地温和操作,减少剪切力,减少切断DNA 分子的可能性；分子热运动也会减少所抽提到的DNA分子量,所以提取过程也要尽可能在低温下进行.另外细胞内及抽提器皿中污染的核酸酶也会降解制备过程中的DNA,所以制备过程要抑制其核酸酶的活性.

另外制备的细菌染色体DNA 必须是高纯度的,以满足基因工程中各种酶反应的需要,制备的样品必须没有蛋白污染,没有RNA,各种离子浓度应符合要求,这些在染色体制备时都应考虑到.

大肠杆菌染色体DNA 抽提首先收集对数生长期的细胞,然后用离子型表面活性剂十二烷基磺酸钠（SDS）破裂细胞,SDS 具有的主要功能是：（1）溶解细胞膜上的脂类和蛋白质,因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜；（2）解聚细胞膜上的脂类和蛋白质,有助于消除染色体DNA上的蛋白质；（3）SDS 能与蛋白质结合成为R1—0—SO3R2—蛋白质的复合物,使蛋白质变性而沉淀下来.但是SDS 能抑制核糖核酸酶的作用,所以在以后的提取过程中,必须把它除干净.以免影响下一步RNase的作用.破细胞后RNA经RNase消化除去,蛋白质经苯酚、氯仿:异戊醇抽提除去经洒精沉淀回收DNA.枯草杆菌染色体制备与上类似,但略加修改的方法要适合教学要求.枯草杆菌是格兰氏阳性菌,所以在SDS 处理前需要使用溶菌酶裂解细胞壁.溶菌酶是一种糖苷水解酶,它能水解菌体细胞壁的主要化学成份肽聚糖中的β—1,4 糖苷键,有助于细胞壁破裂,破裂的细胞壁在SDS 的作用下溶菌,同时用蛋白酶K 消化蛋白质,能解离缠绕在染色体DNA上的蛋白质,然后加入一定量的醋酸钾,使蛋白质变性,通常离心除去,在这期间可加入核糖酸酶消化RNA,最后用乙醇回收DNA.

此二种方法抽提的细菌染色体DNA,无RNA和蛋白质污染,可用于限制性内切酶消化,分子再克隆等.但在下一步实验前,要测定其DNA的浓度,常用测定DNA 浓度的方法,是溴化乙锭电泳法；当DNA 样品在琼脂糖凝胶中电泳时,加入的EB 会增强发射的荧光.而荧光的强度正比于DNA 的含量,如将已知浓度的标准样品作电泳对照,就可估计出待样品的浓度。

dna提取方法种类

DNA提取的几种方法

(1).浓盐法

利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同，将二者分离，常用的方法是用1M 氯 纳提取化钠抽提,得到的DNP粘液与含有少量辛醇的 氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间，而DNA位于上层水相中,用2倍体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来.

也可用0.15 MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脱氧核糖蛋白,再按氯仿---异醇法除去蛋白.

两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些.

以稀盐酸溶液提取DNA 时,加入适量去污剂,如SDS可有助于蛋白质与DNA 的分离。在提取过程中为抑制组织中的DNase对DNA 的降解作用,在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂.通常用.15MNaCL,0.015M柠檬钠,并称SSC溶液,提取DNA.

（2）.阴离子去污剂法:

用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可以直接从生物材料中提取DNA .由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取DNA.

（3）.苯酚抽提法:

苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用.用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。离心分层后取出水层，多次重复操作，再合并含DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇沉淀DNA 。此时DNA是十分粘稠的物质，可用玻璃漫漫绕成一团，取出。此法的特点是使提取的DNA保持天然状态 .

（ 4）.水抽提法:

利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去RNA，然后将沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中,离心后收集上清液.在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M.加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌法搅出.然后分别用66% ٠80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥,既得DNA样品.此法提取的DNA中蛋白质含量较高,故一般不用.为除蛋白可将此法加以改良,在提取过程中加入SDS.

dna提取常用方法有哪些种类

原则上来说，凡是含有DNA的生物 材料都可以考虑。哺乳动物的血液不能 够作为提取DNA的材料，因为哺乳动物 的成熟的红细胞没有细胞核，不含有 DNA。我们在实验中，一般要选用DNA 含量相对较高的生物组织，这样成功的 可能性更大。例如，鸡血就常用作提取 DNA的材料，因为鸡血细胞核DNA含 量丰富而且容易得到

常见dna提取方法

发光是因为用了发光物质标记的。 利用液氮对组织进行研磨，从而破碎细胞。细胞提取液中含有的SDS溶解膜蛋白而破坏细胞膜，使蛋白质变性而沉淀下来。EDTA抑制DNA酶的活性。再用酚、氯仿抽提的方法去除蛋白，得到的DNA溶液经乙醇沉淀。 取4g新鲜叶片，在液氮中研磨成粉末状（越细越好）。 2．转移至50mL离心管中，加人16mL细胞提取液，充分混匀。65 ℃水浴保温20min。 3．从水浴中取出离心管，加人5mL5mol/LKCl溶液，混匀，冰浴20 min。 4.4000r/min离心20min。 5.将上清液转移到另一50mL离心管中。 6．加等体积酚／氯仿混匀，12OO0r／min离心5min，取上清。 7．加等体积氯仿，混匀，12000r/min，离心5min，取上清。 8．加人0.6-1倍体积的异丙醇（沉淀DNA)，混匀。 9．离心获得沉淀，70％乙醇洗3次。风干沉淀。 10．加人500μLTE缓冲液，溶解DNA。 11．取3μL上清液，琼脂糖凝胶电泳检测DNA浓度、质量。 最后用EB跑电泳就可以看到你在电视上看到的发光的dna了

dna的提取技术

DNA提取主要是CTAB方法，其他的方法还有物理方式如玻璃珠法、超声波法、研磨法、冻融法。

dna提取经典方法

以下是从动物病毒中快速提取DNA的方法，请参考该方案采用离心操作，适合于从动物组织样品中快速提取病毒基因组DNA。以下步骤都在室温下进行。

1．取50-100mg的动物组织加入约3倍体积的生理盐水进行匀浆，充分匀浆后10,000rpm离心2min去除残余组织。

2．取150μl上清液至新的洁净离心管中。

3．加入500μlDNA提取液至上清液中，颠倒混匀，室温静置5-10min裂解病毒。

4．把DNA吸附柱装在2ml收集管中，把裂解后的液体全部转移至DNA吸附柱中，10,000rpm离心1min。

5．倒弃滤液，把DNA吸附柱装回收集管中，加入400μl洗涤液至DNA吸附柱中，10,000rpm离心1min。注：洗涤液初次使用前请先加入48ml无水乙醇。使用完立即盖上盖，以防乙醇挥发。

6．重复步骤5。

7．倒弃收集管中的滤液，把DNA吸附柱装回收集管中，10,000rpm离心3min。

8．把DNA吸附柱装在新的洁净离心管中，加入30-50μl洗脱液至吸附柱中央，静置1-2min，10,000rpm离心1min，所得即为DNA溶液，可用于后续实验，若暂时不用，应于-20℃可储存。

dna提取的经典方法是什么

杂质：多酚类、糖类物质较多去除方法：材料粉碎后，在加细胞裂解液前，加入一些缓冲液清洗来除去多糖：缓冲液配比（100mmol/LTris－HCl，pH8.0；100mmol/LEDTA；250mmol/LNaCl；50ug/mL蛋白酶K；1％月桂酸钠Nalauroylsarcosine），50度保温过<Rozman和Komel，1994>，或者只用100mmol/LTris－HCl溶液清洗<李晓波等，2002>。去除多酚成分，可以添加Vc等抗氧化剂（参考浓度30～60mmol/L）<胡春根等，1998>和PVP、PEG等酚的结合剂，防止酚类与DNA的结合。