抽取质粒的作用(质粒抽提的实验报告)

质粒抽提的实验报告

实验室用公司试剂盒提取质粒，一般采用的是碱裂解法。比如从大肠杆菌的菌液中提取，基本原理是先加入RNA酶，把RNA去掉，然后用碱裂解菌体，用酸平衡，并且SDS和蛋白质结合形成沉淀，顺便把与蛋白结合的基因组DNA沉淀下来。

最后上清中含有质粒DNA，把它过柱洗脱下来溶到水中就完成了质粒的提取。

质粒dna的抽提实验报告

用乙醇沉淀法浓缩质粒DNA：

提取液中加入等体积预冷的5mol/L Licl 充分混匀，1000rpm 4℃离心15min，取上清。

加等体积异丙醇，混匀，室温放置10min，10000rpm 4℃离心15min。

弃上清，纯点加入70%乙醇洗涤一次，沉淀风干10~15min。

500ul，含RNA酶的TE（pH8.0）溶解沉淀，室温放置30min。（将质粒RNaesA混合物用酚：氯仿抽提一次，然后用氯仿抽提一次）

用2.5倍体积无水乙醇沉淀质粒，风干10min。

加1ml灭菌水溶解沉淀，加500ul PEG-MgCl2溶液，充分混合，室温10min，12000rpm 4℃离心15min。

用70%乙醇重悬沉淀，12000rpm 4℃离心15min。

弃上清，沉淀用70%乙醇处理一次，最后将质粒，溶于500ulTE（pH8.0）中，取1ul质粒DNA，100倍稀释后测OD260，计算DNA的浓度，其余封装，-20℃保存备用。

质粒抽提实验报告讨论

稀释一定的浓度梯度，粗定量方法：跑琼脂糖胶，跟Marker对比，估算量 可以使用分光光度计，在260和280nm测吸光度，计算得到比较精确值

质粒抽提的目的

因为异丙醇沉淀的效果要好一些，但最后大多用酒精沉淀，因为酒精容易挥发，对下游的实验影响小。

异丙醇比较疏水，能很更好地沉淀核酸，用乙醇的目的是去盐，它比异丙醇更亲水，所以能去掉一些盐离子。 有时还用70%的乙醇洗样品也是为了增加盐的溶解度。

质粒抽提过程中 哪一步关键

质粒抽提

质粒抽提方法即去除 RNA，是将质粒与细菌基因组 DNA分开，去除蛋白质及其它杂质，以得到相对纯净的质粒的方法。

提取质粒DNA的方法有很多种，从提取产量上分可分为微量提取、中量提取、大量提取，从使用仪器上分可分为一般提取和试剂盒方法提取，从具体操作方法分可以分为碱裂解法、煮沸法、牙签法等，各种不同的方法各有其优缺点，根据不同的实验目的可以采用合适的提取方法。

质粒抽提实验中溶液的作用

1.

实验方法 碱裂解法抽提质粒 DNA

2.

实验原理 基于质粒 DNA 与染色体 DNA 变性与复性的差异. 分子大小 构型 pH12.6 pH4.8 质粒 DNA 小 环状 变性不完全 复性 染色体 DNA 大 环状 完全变性 不能复性

3.

实验步骤 1)质粒提取 1. 10,000g,1min 离心收集 1.5-5ml 菌液沉淀于 1.5ml 离心管中.

质粒抽提的实验报告是什么

分离质粒时，可以将质粒去得很干净。方法为：先用TE之类的试剂将菌液悬浮起来，再用NaOH和SDS将菌液裂解（起裂解作用的主要是NaOH，但此时，SDS可以与蛋白很好的结合）。第三步，加入酸中合第二步中的碱，并且将SDS沉淀下来，同时，SDS和蛋白也一起沉淀下来，而基因组上面有很多的蛋白，这样基因组就一起沉淀下来，上清只有质粒了。上清的质粒用乙醇沉淀，这样得到的质粒基本没有基因组。而分离基因组时，一般也是用SDS裂解（想对于碱裂解，SDS比较温和）。同时还用蛋白酶K处理，将基因组上的蛋白降解掉，这样就得到了基因组DNA。再用乙醇沉淀，去掉其他的东东。如果菌中含有质粒，质粒也一起提出来，无法去掉。至于后来的试剂盒，如柱式，前其原理一样，不过最后一步纯度是用柱子的方法。

主要是在分离过程中起中和ph的作用

dna经过碱裂解（naoh）后，染色体dna氢键断裂，双螺旋解开，质粒dna氢键断裂，互补链不完全分离，再经过乙酸中和后成中性后者复性离心就可以达到分离的效果