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pcr常用物质的作用(pcr的主要作用)

更新:2023-04-28 06:07编辑:bebe归类:两性养生人气:0

pcr的主要作用

PCR 应该是一种聚合物材料,PCR风管就是用这种材料制成的风管。

PCR管是生物实验过程中常用的耗材,例如BBSP的PCR管,主要作用是为PCR(聚合酶链式反应)实验提供容器,可以应用于突变、测序、甲基化、分子克隆、基因表达、基因分型、医学、法医学等领域。常见的PCR管由管体、盖体组成,管体和盖体连接在一起。

pcr的重要性

人类对于核酸的研究已经有100多年的历史。20世纪60年代末70年代初,人们致力于研究基因的体外分离技术。在此,pcr技术应运而生。

PCR(Polymerase Chain Reaction),即“聚合酶链式反应”,是为了解决在体外特异性地扩增某个基因的问题,从而满足对核酸的体外研究和应用。

在PCR技术中,DNA聚合酶起着至关重要的作用,从某种意义上说,DNA聚合酶的研究进展决定着PCR技术的发展趋势和应用范围,研究者们一直在努力探寻着酶学性能好、保真度高的PCR用DNA聚合酶。

pcr的用途及注意事项

PCR技术原理和操作

PCR技术是指,在DNA聚合酶催化下,以母链DNA为模板,以特定引物为延伸起点,通过变性、退火、延伸等步骤,体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。

一、PCR技术的基本原理和操作

1、PCR反应的成分和作用

总体积:一般为25μl~100 μl

(一)Mg2+:终浓度为1。5~2。0mmol/L,其对应dNTP为200 μmol/L,注意Mg2+与dNTPs之间的浓度关系,由于dNTP与Taq酶竟争Mg2+,当dNTP浓度达到1 mmol/L时会YZTaq酶的活性。 Mg2+能影响反应的特异性和产率。

(二)无Mg2+buffer:由纯水、kcl、Tris组成。Tris用于调节反应体系pH值,使Taq酶在偏碱性环境中反挥活性。kcl可降低退火温度,但不能超过50 mmol/L,否则会YZDNA聚合酶活性。

(三)BSA:一般用乙酰化的BSA,起着减少PCR管对Taq酶的吸附作用,对Taq酶有保护作用。

(四)底物(dNTPs):dNTPs具有较强酸性,其储存液用NaOH调pH值至7。0~7。5,一般存储浓度为 10 mmol/L,各成份以等当量配制,反应终浓度为20~200μmol/L。高浓度可加速反应,但同时增加错误掺入和实验成本;低浓度可提高精确性,而反应速度会降低。

(五)Taq酶:能耐95℃高温而不失活,其Z适pH值为8。3~8。5,Z适温度为75~80℃,一般用72℃。能催化以DNA单链为模板,以碱基互补原则为基础,按5’→3’方向逐个将dNTP分子连接到引物的3’端,合成一条与模板DNA互补的新的DNA子链。无3’→5’的外切酶活性,没有校正功能。某种dNTP或Mg2+浓度过高,会增加其错配率。用量一般为0。5~5个单位/100μl。

(六)模板:PCR对模板DNA的纯度不要求很高,但应尽量不含有对PCR反应有YZ作用的杂质存在,如蛋白酶、核酸酶、TqaDNA聚合酶YZ剂、能与DNA结合的蛋白质。模板DNA的量不能太高,否则扩增可能不会成功,在此情况下可适当稀释模板。

(七)引物:引物浓度一般为0。1~0。5μmol/L,浓度过高会引起错配和非特异扩增,浓度过低则得不到产物或产量过低。引物长度一般15~30个碱基,引物过长或过短都会降低特异性。其3’末端一定要与模板DNA配对,末位碱基Z好选用A、C、G(因T错配也能引发链的延伸)。

引物G+C约占45~55%,碱基应尽量随机分布,避免嘧啶或嘌呤堆积,两引物之间不应有互补链存在,不能与非目的扩增区有同源性。

2、PCR反应步骤和反应条件选择(影响因素)

a、变性:模板变性完全与否是PCR成功的关键,一般先于94℃(或95℃)变性3~10min,接着94℃变性30~60s。

b、退火:退火温度一般低于引物本身变性温度5℃。引物长度在15~25bp可通过公Tm=(G+C)×4℃+(A+T)×2℃计算退火温度,一般退火温度在40~60℃之间,时间为30~45s。如果(G+C)低于50%,退火温度应低于55℃。较高的退火温度可提高反应的特异性。

c、延伸:延伸温度应在Taq酶的Z适温度范围之内,一般在70~75℃。延伸时间要根据DNA聚合酶的延伸速度和目的扩增片段的长度确定,通常对于1kb以内的片段1min是够用的。

以上述三个步骤为一个循环,每一循环的产物均可作为下一个循环的模板,经过n次循环后,目的DNA以2n的形式增加

pcr 作用

PCR中的DNA样本或RNA样本称为底物,加入引物,在探戈酶和缓冲液原料的作用下,经过变性和退火延伸30次左右,然后用琼脂糖电泳检测PCR产物。

pcr的概念和应用

PCR塑料是减少塑料污染,助力“碳中和”的重要方向之一

经过几代化学家和工程师的不懈努力,以石油、煤炭、天然气为原料生产的塑料,因其质轻、耐用、美观等特点,成为人类生活必不可少的材料。然而,塑料的大量使用也导致大量塑料垃圾产生。消费后回收(PCR)塑料,成为减少塑料环境污染,助力化工行业迈向“碳中和”的重要方向之一。

回收再生的塑料颗粒与原始树脂混合,能够制造出各种新型塑料产品。这种方式,不仅降低了二氧化碳的排放,也减少了能源的消耗。

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