裂解缓冲液的作用(裂解液配方)

更新：2023-04-27 16:07编辑：bebe归类：心理健康人气：0

裂解液配方

RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。

RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA裂解液的配方有很多种，根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。关于不同的RIPA裂解液以及我们生产的其它裂解液的主要特点和差异，以及如何选择裂解液可参考附录。

组织裂解液（全细胞蛋提取）：

1：Tris-HCL 50mmoL/L PH 7.4

2:Nacl 150 mmoL/L

3:去氧胆酸钠 0.25%

4：NP-40或Triton-x-100 1%

5:EDTA 1 mmoL/L

6：PMSF 1 mmoL/L

7：Aprotinin 1μg/ml

8:leupeptin 1μg/ml

9:pepstain 1μg/ml

其中:7,8,9作用不持久,要使用前加入.

细胞裂解液：1：NP-40裂解体系：　150 mmoL/L Nacl

1.0%NP-40或Triton-x-100

50 mmoL/L Tris(PH8.0)

2：RIPA裂解体系：150 mmoL/L Nacl

1.0%NP-40或Triton-x-100

0.5%脱氧胆酸钠

0.1%SDS

50 mmoL/L Tris( ph8.0)

RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组

DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。

前者较温和，后者比较剧烈，但更彻底。

western blotting的Lysis buffer,是裂解细胞提取蛋白用的裂解液.

SDS是十二烷基硫酸钠,

RIPA裂解液组成： 50 mM Tris-HCl (pH 7.4,三羟甲基氨基甲烷-盐酸), 150 mM NaCl, 1% NP-40,0.1% SDS（不同公司的配比不同,有用Tris-hcl PH=8.0的,加0.5%的去氧胆酸钠）

NP-40（Tergitol-type ）是很温和的去垢剂,主要用于全细胞蛋白的提取,全称乙基苯基聚乙二醇-40.

tris-triton组成：10 mM Tris,100 mM NaCl,1 mM EDTA,1 mM EGTA,1% Triton X-100（聚乙二醇辛基苯基醚）,10%的甘油,0.1% SDS,0.5% deoxycholate（脱氧胆酸盐）.

红细胞裂解液的原理是利用细胞内外存在盐离子浓度差异而导致细胞膜胀破,所以直接用水稀释就行了。