三糖铁琼脂作用(三糖铁琼脂斜面图片)
三糖铁琼脂斜面图片
VP实验它是微生物检验中常用的生化反应之一。
vp试验操作方法：
1.O’Meara氏法：将试验菌接种于通用培养基，于36±1°C培养48h，培养液1ml加O’Meara试剂（加有0.3%肌酸Creatine或肌酸酐Creatinine的40%氢氧化钠水溶液）1ml，摇动试管1~2min，静置于室温或36±1°C恒温箱，若4h内不呈现伊红、即判定为阴性。亦有主张在48~50°C水浴放置2h后判定结果者。
2.Barritt氏法：将试验菌接种于通用培养基，于36±1°C培养4天、培养液2.5ml先加入5°Cα萘酚（2-na-phthol）纯酒精溶液0.6ml，再加40%氢氧化钾水溶液0.2ml，摇动2~5min，阳性菌常立即呈现红色，若无红色出现，静置于室温或36±1°C恒温箱，如2h内仍不显现红色、可判定为阴性。
3.快速法：将0.5%肌酸溶液2滴放于小试管中、挑取产酸反应的三糖铁琼脂斜面培养物一接种环，乳化接种于其中，加入5%α-萘酚3滴，40%氢氧化钠水溶液2滴，振动后放置5min，判定结果。不产酸的培养物不能使用。
三铁糖琼脂实验
作为一种分子标记(Marker)，构建分子图谱。分子标记克隆在质粒上，可以繁殖及保存。 DNA Marker 是分子量不同的DNA片段，主要用途就是DNA 分子凝胶电泳时，加样用做对比来检测琼脂糖凝胶是否有问题。 现在常用的DNA MARKER有两种，一种是病毒等DNA经过酶切获得的，分子量大小有零有整，另外一种是固定数值的，比如100BP，200BP等。 两种MARKER都不难制作，对于第一种，稍微难一些，主要是要获得病毒等大的基因组片段，然后用适当的酶切，切割完全以后，就能得到相应的图谱。
第二中实际上很简单，如果你手头有任何一个载体，而且它的序列完全清楚，那么可以采用PCR的方法获得一系列大小不同的片段，比如上游引物可以使用一个，然后用数数的方法确定下游100BP处的下游引物，扩增出的就是100BP的片段，200BP处的引物就是200BP的片段，依此类推，可以获得一系列不同大小的片段，扩增后，把它们放到一起，就获得了自制的MARKER了
三糖铁琼脂高层培养斜面呈什么色
PDA培养基的配制及试管斜面制作
1.实验材料
1.1试剂材料
土豆，葡萄糖，琼脂，试管，试管架，天平，注射用硫酸链霉素，注射用青霉素钠，三角瓶，灭菌锅，电磁炉，超净工作台，烧杯，1mL移液器，培养皿
1.2PDA培养基配方
土豆（去皮）200g
葡萄糖20g
琼脂15-20g
蒸馏水1000mL
pH 自然
2.实验方法与步骤
2.1称量和熬煮
将土豆去皮，按自己所需的量（例如配制1L）称取土豆，将土豆切成小块放入锅内，加入适量的蒸馏水，在电磁炉上加热至沸腾，30min后用4层纱布在大量杯上过滤，弃掉滤渣，滤液用蒸馏水补足1L。
2.2溶解
用天平称取20g葡萄糖加入滤液中，用玻璃棒搅拌，使其完全溶解。
2.3分装
称取8-10g琼脂，加入所用三角瓶中，然后将滤液分装到三角瓶中，每瓶500mL，用玻璃棒将琼脂搅匀。
2.4加棉塞
培养基分装完毕后，在三角瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内造成污染，并保证有良好的通气性。
2.5包扎
加塞后，在棉塞外用两层报纸包裹，其外用橡皮筋包扎好，标记。
2.6灭菌
将配制完成的培养基，包好的平板及其他所需用品一起放入灭菌锅灭菌（见灭菌锅使用方法）。
3.试管斜面制作方法与步骤
3.1前两步同2.1，2.1步骤
3.2加热溶解
量取500mL滤液到1000mL的烧杯中，再加入8-10g的琼脂，用玻璃棒搅匀，放入微波炉缓慢加热溶解，加热其间注意不要让培养基溢出烧杯，不时用玻璃棒搅拌。
3.3分装
等琼脂溶解后，将培养基分装到事先准备好的试管中。分装量约占试管高度的1/4，管口尽量不要沾染培养基。
3.4加塞
培养基分装完毕后，在试管口上塞上棉塞或橡胶塞，以阻止外界微生物进入培养基内造成污染，并保证有良好的通气性。
3.5包扎
加塞后，试管7-9支捆用橡皮筋捆好，在塞外用两层报纸包裹，其外用橡皮筋包扎好，标记。
3.6灭菌
将包好的试管和其他所需灭菌物品一同放入灭菌锅灭菌。
3.7摆斜面
灭菌完成后，将试管拿出，在超净工作台下摆成斜面，根据自己需要选择合适的倾斜度。
三糖铁琼脂结果表达
克氏双糖铁结果：培养基的指示剂为酚红试剂酸性成黄色，碱性时呈红色，大肠埃希菌使乳糖发酵分解葡萄糖产生大量的酸使斜面和底层呈黄色。
克氏双糖铁成分：
乳糖10g。
葡萄糖1g。
氯化钠5g。
柠檬酸铁铵0.5g。
硫代硫酸钠0.5g。
克氏双糖铁制法：
将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中，校正pH。加入琼脂，加热煮沸，以溶化琼脂。加入0.2%酚红水溶液12.5mL，摇匀。分装试管，装量宜多些，以便得到比较高的底层。121℃高压灭菌15min。放置高层斜面备用。
三糖铁琼脂斜面怎样穿刺
接种细菌的方法各有什么用途：
1、平面接种法：此方法主要用于鉴定或保存菌种，或观察细菌的某些生化特性和动力。
2、菌落分纯法：此方法主要用于分离琼脂平板上的混合菌。
3、液体培养基接种法：此方法可用于比浊试验中。
4、平板划线接种法（又称分离培养法）：平板划线接种法为最常用的分离培养细菌的方法，通过平板划线后，可使细菌分散生长，形成单个菌落，有利于从含有多种细菌的标本中分离出目的菌。平板分离划线的方法比较多，其中以分区划线发育曲线划线法较为重用。其目的都要时细菌呈现单个菌落生长，便于同杂菌菌落鉴别。
5、纯培养细菌接种法：用于培养保存菌种及其实验用。
6、半固体培养基穿刺培养法：用于保存菌种及间接观察细菌之动力（无动力之细菌仅沿穿刺线生长，清晰可见；有动力的细菌使培养基呈现浑浊样，穿刺线甚至难以看出。）接种注意事项：1、在超净工作台上操作，工作台在使用前要紫外消毒，酒精消毒等。2、应在酒精灯火焰前操作。3、取菌种前灼烧接种针或接种环（要烧红）。4、烧红的接种针（环）少使冷却在取菌种，以免烧死菌种。5、接种后应尽快塞上面塞。
三糖铁琼脂原理
将琼脂洗净，用适量温开水泡开成为溶液，加入果汁，搅拌均匀用装果冻的容器盛放，放在冰箱的冷藏室里，一会儿就成了。要是想加水果的话，在放进冰箱前加进琼脂果汁里就行了。琼脂加多了的话，会成为白色粉状沉淀。
三糖铁琼脂实验报告
选择培养基:是在培养基中加入抑制剂，抑制非目的菌生长，选择性促进性促进目的菌生长的培养基，是固体培养基，常用的有ss琼脂、伊红美蓝琼脂、麦康凯琼脂等。
鉴别培养基:在培养基中，进入糖（醇）类、蛋白质、氨基酸等底物及指示剂，用以观察细菌的生化反应，从而鉴定和鉴别细菌，此类培养基称为鉴别培养基，有的是固体培养基，如克氏双糖铁琼脂等。有的是液体培养基如糖发酵培养基。