您当前所在位置:主页 > 中医养生 >

ypd培养基作用(ypd培养基配方最适ph)

更新:2023-04-23 02:47编辑:bebe归类:中医养生人气:0

ypd培养基配方最适ph

如果说最基本的,当然是

载体、目的基因、宿主细胞和工具酶

恩,就这么简单,最基本的

如果你要实际操作的话,以质粒基因工程改造酵母菌为例(需要的设备材料用粗体标注):

首先

移液管/移液器+无菌枪头

是必备物品

你需要含有质粒的

细菌

(一般是大肠杆菌),将它在

超净工作台

中接种在培养细菌的

液体培养基

中(一般是LB培养基),在

恒温摇瓶柜

里摇瓶培养到足够浓度,用

质粒抽提盒(试剂盒)+离心机

将细菌溶解,沉降掉蛋白质、拟核和其他杂质,提取出来质粒,其中还需要使用

60°C恒温鼓风箱和37°C恒温培养箱

,再用

光度计

测质粒浓度。

将提取出来的质粒加入

限制性核酸内切酶

以及

Buffer(酶发挥活性所需环境缓冲液)

,置于

37°C水浴锅

中保温,至于保温多久看多贵的酶了。

保温结束后,使用

DNA柱回收试剂盒

和离心机将切好的质粒回收,去掉酶和其他东西。再加入用同样方法切割好的、具有相同黏性末端的

目的基因

DNA连接酶

Buffer

,置于

16°C培养箱

水浴培养,时间也是看酶多贵。

取细菌(大肠杆菌)制备

感受态细菌

保存于

-70°C冰箱

中,制备过程不赘述,其中需要使用

冷冻离心机

。用同样方法柱回收连接产物并加入在冰上解冻的感受态细菌悬液中,

42°C水浴锅

热击90秒再置于冰上,加入LB液体培养基并置于恒温摇瓶柜培养使细菌恢复生长。

制备

含抗生素(一般是氨苄青霉素)的LB固体培养基

并倒在

培养皿

中冷却,用

涂布棒

将大肠杆菌涂到平板上倒置于37°C培养箱培养,筛选出转化成功含有氨苄抗性基因的大肠杆菌。挑取部分单菌落置于添加了

Loading(染色剂)、热稳定DNA聚合酶、Buffer、dNTP、引物RNA

PCR小管

中,在

PCR仪

中扩增。

制备

琼脂糖和TAE缓冲液配比并添加DNA染色剂(接触毒性)

做的

核酸凝胶

,将PCR产物和

Marker(条带大小的指示剂)

点样在凝胶中用

核酸凝胶电泳仪

检测含有目的基因质粒的是哪一个菌落

确定是哪个菌落后,挑取该菌落接种在新的LB液体培养基中摇瓶培养,用同样的方法提取重组质粒,制备

感受态酵母菌

并将重组质粒加入转化。

制备

含抗生素(同上)的YPD固体培养基

并将转化产物涂布在平板上筛选,并进行PCR验证或进一步验证它的目的基因表达产物即可。基因工程的操作到这基本就算完了。

————分割线————

如果是动植物细胞,也就是转化的方式有所不同,比使Ti质粒转座子、基因枪、显微注射、病毒侵染等。

以上是我们实验室的操作方法,实验室不同甚至预算不同都会引起方法有略微的差别。比如有一些繁琐的步骤只要买一个试剂盒就能解决,但是试剂盒也不便宜就是了。

如果你要了解,那这些基本够了

如果你要亲手实践一下,劝你还是联系实验室吧,毕竟这些东西就算土豪也肉疼……

ypda培养基配方

ypda液体培养基可以加琼脂,加后就成了固体培养基啦

ypd培养基配方最适PH

LB培养基的配方如下: 胰蛋白胨(Tryptone) 10g/L 酵母提取物(Yeast extract) 5g/L 氯化钠(NaCl) 10g/L从培养基成分上看不可以互相替换

酵母膏胨葡萄糖(YPD)琼脂培养基用于酵母菌的培养配方:1% Yeast Extract(酵母膏) ,2% Peptone(蛋白胨) ,2% Dextrose (glucose)(葡萄糖),若制固体培养基,加入2%琼脂粉

ypd培养基培养什么菌

可以用胰蛋白胨和蛋白胨的区别:蛋白胨是是将肉、酪素或明胶用酸或蛋白酶水解后干燥而成的外观呈淡黄色的粉剂。胰蛋白胨,又称胰酪蛋白胨、胰酶消化酪蛋白胨,是一种优质蛋白胨,是以新鲜牛肉和牛骨经胰酶消化,浓缩干燥而成的浅黄色粉末。

ypd培养基的配方

YPD培养基又叫酵母浸出粉胨葡萄糖培养基,加入琼脂的又叫酵母膏胨葡萄糖(YEPD)琼脂培养基   用于酵母菌的培养 。配方:1% 酵母膏 ,2% (蛋白胨) ,2% 葡萄糖),若制固体培养基,加入2%琼脂粉。培养基的选择主要看你要培养什么。因为斜面培养基和种子培养基主要目的是让菌体张起来,扩大培养。但发酵培养基由于牵扯到目标产物的生产所以需要优化组分,提高效价。你所写的固体培养基基本没问题,不过最好把酵母粉换成酵母浸粉这样好利用,去掉琼脂就可以凑合者当种子培养基。但是发酵培养基就需要优化了,起码要有迟效碳源,迟效氮源,无机盐生产因子等。酵母发酵培养基可以在种子培养基的基础上参考加入0.1%的硫酸铵。这个可以查到种子培养基 葡萄糖100g/l,蛋白胨5.3g/l,酵母膏2g/l尿素2g/l硫酸镁0.5g/l ph自然发酵培养基 葡萄糖100g/l,蛋白胨1.8g/l,酵母膏0.5g/l 磷酸二氢钾2g/l ph自然参看

http://www.docin.com/p-173940813.html

yep培养基ph

LBA4404本身带有链霉素抗性和利福平抗性,培养温度为28℃,摇菌转速一般为180~220rpm,是一种弱毒的农杆菌,最好配合超双元载体使用。常用YEP培养基来培养。

yepd培养基的配制

YPD 或YEPD,:Yeast Extract Peptone Dextrose Medium(1L),又叫酵母浸出粉胨葡萄糖培养基,加入琼脂的又叫酵母膏胨葡萄糖(YPD)琼脂培养基

用于酵母菌的培养

配方:1% Yeast Extract(酵母膏) ,2% Peptone(蛋白胨) ,2% Dextrose (glucose)(葡萄糖),若制固体培养基,加入2%琼脂粉

配制方法:

1 溶解10gYeast Extract(酵母膏), 20gPeptone(蛋白胨)于900ml水中,如制平板加入20g琼脂粉

2 高压 115 度 15min

3 加入100ml 20gDextrose (glucose)(葡萄糖),(葡萄糖溶液灭菌后加入)

注:葡萄糖,yeast extract ,peptone溶液混合后在高温下可能会发生化学反应,导致培养基成分变化,所以要分别灭菌后再混合。葡萄糖可以过滤除菌,也可以115℃ 15min灭菌。

YPD另外一种配方:

2%Trypton(胰化胨或称胰蛋白胨)、2%Dextrose (glucose)(葡萄糖),若制固体培养基,加入2%琼脂粉,115℃ 15min灭菌。液体YPD培养基可常温保存;琼脂YPD平板在 4℃可保存几个月。加入Zeocin 100ug/ml,成为YPDZ培养基,可以4℃条件下保存1~2 周。

YPEG:除了用3%乙醇和3%甘油代替葡萄糖作为碳源外,其他成分同YPD

YPDZ 是在YPD的基础上加上ZEOCIN抗生素。

YPDA 是在YPD的基础上加0.003%的腺嘌呤硫酸盐

ypd培养基ph是多少

YPD培养基,适于酵母菌,白色念珠菌培养。配制方法:

1 溶解10g 酵母膏, 20g 蛋白胨(Peptone或Trypton均可)于900ml水中,如制平板加入20g琼脂粉。

2 配制100ml20%葡萄糖溶液3 培养基和葡萄糖溶液高压灭菌,121度20分钟。4 待温度降至50度左右,混合培养基和葡萄糖溶液,得到完全培养基。不可加抗生素,注意防污染。注:如果先混合培养基和葡萄糖再高温灭菌,会发生梅拉特反应,使培养基成分发生不利变化。颜色会变为深褐色,闻之有酱油味。

ypda培养基ph调多少

不同微生物所需环境的PH不同,故培养基在配置时需要调节PH。可以用1mol/L的NaOH或者1mol/L的盐酸调节ph,用ph计测量。

下一篇:澳大利亚益生菌副作用(澳大利亚最好的益生菌的用法) 上一篇:tst眼霜副作用(tst有几款眼霜的区别)