ypd培养基作用(ypd培养基配方最适ph)
ypd培养基配方最适ph
如果说最基本的,当然是
载体、目的基因、宿主细胞和工具酶
恩,就这么简单,最基本的
如果你要实际操作的话,以质粒基因工程改造酵母菌为例(需要的设备材料用粗体标注):
首先
移液管/移液器+无菌枪头
是必备物品你需要含有质粒的
细菌
(一般是大肠杆菌),将它在超净工作台
中接种在培养细菌的液体培养基
中(一般是LB培养基),在恒温摇瓶柜
里摇瓶培养到足够浓度,用质粒抽提盒(试剂盒)+离心机
将细菌溶解,沉降掉蛋白质、拟核和其他杂质,提取出来质粒,其中还需要使用60°C恒温鼓风箱和37°C恒温培养箱
,再用光度计
测质粒浓度。将提取出来的质粒加入
限制性核酸内切酶
以及Buffer(酶发挥活性所需环境缓冲液)
,置于37°C水浴锅
中保温,至于保温多久看多贵的酶了。保温结束后,使用
DNA柱回收试剂盒
和离心机将切好的质粒回收,去掉酶和其他东西。再加入用同样方法切割好的、具有相同黏性末端的目的基因
,DNA连接酶
和Buffer
,置于16°C培养箱
水浴培养,时间也是看酶多贵。取细菌(大肠杆菌)制备
感受态细菌
保存于-70°C冰箱
中,制备过程不赘述,其中需要使用冷冻离心机
。用同样方法柱回收连接产物并加入在冰上解冻的感受态细菌悬液中,42°C水浴锅
热击90秒再置于冰上,加入LB液体培养基并置于恒温摇瓶柜培养使细菌恢复生长。制备
含抗生素(一般是氨苄青霉素)的LB固体培养基
并倒在培养皿
中冷却,用涂布棒
将大肠杆菌涂到平板上倒置于37°C培养箱培养,筛选出转化成功含有氨苄抗性基因的大肠杆菌。挑取部分单菌落置于添加了Loading(染色剂)、热稳定DNA聚合酶、Buffer、dNTP、引物RNA
的PCR小管
中,在PCR仪
中扩增。制备
琼脂糖和TAE缓冲液配比并添加DNA染色剂(接触毒性)
做的核酸凝胶
,将PCR产物和Marker(条带大小的指示剂)
点样在凝胶中用核酸凝胶电泳仪
检测含有目的基因质粒的是哪一个菌落确定是哪个菌落后,挑取该菌落接种在新的LB液体培养基中摇瓶培养,用同样的方法提取重组质粒,制备
感受态酵母菌
并将重组质粒加入转化。制备
含抗生素(同上)的YPD固体培养基
并将转化产物涂布在平板上筛选,并进行PCR验证或进一步验证它的目的基因表达产物即可。基因工程的操作到这基本就算完了。————分割线————
如果是动植物细胞,也就是转化的方式有所不同,比使Ti质粒转座子、基因枪、显微注射、病毒侵染等。
以上是我们实验室的操作方法,实验室不同甚至预算不同都会引起方法有略微的差别。比如有一些繁琐的步骤只要买一个试剂盒就能解决,但是试剂盒也不便宜就是了。
如果你要了解,那这些基本够了
如果你要亲手实践一下,劝你还是联系实验室吧,毕竟这些东西就算土豪也肉疼……
ypda培养基配方
ypda液体培养基可以加琼脂,加后就成了固体培养基啦
ypd培养基配方最适PH
LB培养基的配方如下: 胰蛋白胨(Tryptone) 10g/L 酵母提取物(Yeast extract) 5g/L 氯化钠(NaCl) 10g/L从培养基成分上看不可以互相替换
酵母膏胨葡萄糖(YPD)琼脂培养基用于酵母菌的培养配方:1% Yeast Extract(酵母膏) ,2% Peptone(蛋白胨) ,2% Dextrose (glucose)(葡萄糖),若制固体培养基,加入2%琼脂粉
ypd培养基培养什么菌
可以用胰蛋白胨和蛋白胨的区别:蛋白胨是是将肉、酪素或明胶用酸或蛋白酶水解后干燥而成的外观呈淡黄色的粉剂。胰蛋白胨,又称胰酪蛋白胨、胰酶消化酪蛋白胨,是一种优质蛋白胨,是以新鲜牛肉和牛骨经胰酶消化,浓缩干燥而成的浅黄色粉末。
ypd培养基的配方
YPD培养基又叫酵母浸出粉胨葡萄糖培养基,加入琼脂的又叫酵母膏胨葡萄糖(YEPD)琼脂培养基 用于酵母菌的培养 。配方:1% 酵母膏 ,2% (蛋白胨) ,2% 葡萄糖),若制固体培养基,加入2%琼脂粉。培养基的选择主要看你要培养什么。因为斜面培养基和种子培养基主要目的是让菌体张起来,扩大培养。但发酵培养基由于牵扯到目标产物的生产所以需要优化组分,提高效价。你所写的固体培养基基本没问题,不过最好把酵母粉换成酵母浸粉这样好利用,去掉琼脂就可以凑合者当种子培养基。但是发酵培养基就需要优化了,起码要有迟效碳源,迟效氮源,无机盐生产因子等。酵母发酵培养基可以在种子培养基的基础上参考加入0.1%的硫酸铵。这个可以查到种子培养基 葡萄糖100g/l,蛋白胨5.3g/l,酵母膏2g/l尿素2g/l硫酸镁0.5g/l ph自然发酵培养基 葡萄糖100g/l,蛋白胨1.8g/l,酵母膏0.5g/l 磷酸二氢钾2g/l ph自然参看
http://www.docin.com/p-173940813.html
yep培养基ph
LBA4404本身带有链霉素抗性和利福平抗性,培养温度为28℃,摇菌转速一般为180~220rpm,是一种弱毒的农杆菌,最好配合超双元载体使用。常用YEP培养基来培养。
yepd培养基的配制
YPD 或YEPD,:Yeast Extract Peptone Dextrose Medium(1L),又叫酵母浸出粉胨葡萄糖培养基,加入琼脂的又叫酵母膏胨葡萄糖(YPD)琼脂培养基
用于酵母菌的培养
配方:1% Yeast Extract(酵母膏) ,2% Peptone(蛋白胨) ,2% Dextrose (glucose)(葡萄糖),若制固体培养基,加入2%琼脂粉
配制方法:
1 溶解10gYeast Extract(酵母膏), 20gPeptone(蛋白胨)于900ml水中,如制平板加入20g琼脂粉
2 高压 115 度 15min
3 加入100ml 20gDextrose (glucose)(葡萄糖),(葡萄糖溶液灭菌后加入)
注:葡萄糖,yeast extract ,peptone溶液混合后在高温下可能会发生化学反应,导致培养基成分变化,所以要分别灭菌后再混合。葡萄糖可以过滤除菌,也可以115℃ 15min灭菌。
YPD另外一种配方:
2%Trypton(胰化胨或称胰蛋白胨)、2%Dextrose (glucose)(葡萄糖),若制固体培养基,加入2%琼脂粉,115℃ 15min灭菌。液体YPD培养基可常温保存;琼脂YPD平板在 4℃可保存几个月。加入Zeocin 100ug/ml,成为YPDZ培养基,可以4℃条件下保存1~2 周。
YPEG:除了用3%乙醇和3%甘油代替葡萄糖作为碳源外,其他成分同YPD
YPDZ 是在YPD的基础上加上ZEOCIN抗生素。
YPDA 是在YPD的基础上加0.003%的腺嘌呤硫酸盐
ypd培养基ph是多少
YPD培养基,适于酵母菌,白色念珠菌培养。配制方法:
1 溶解10g 酵母膏, 20g 蛋白胨(Peptone或Trypton均可)于900ml水中,如制平板加入20g琼脂粉。
2 配制100ml20%葡萄糖溶液3 培养基和葡萄糖溶液高压灭菌,121度20分钟。4 待温度降至50度左右,混合培养基和葡萄糖溶液,得到完全培养基。不可加抗生素,注意防污染。注:如果先混合培养基和葡萄糖再高温灭菌,会发生梅拉特反应,使培养基成分发生不利变化。颜色会变为深褐色,闻之有酱油味。
ypda培养基ph调多少
不同微生物所需环境的PH不同,故培养基在配置时需要调节PH。可以用1mol/L的NaOH或者1mol/L的盐酸调节ph,用ph计测量。