外切酶作用(外切酶作用位点)

外切酶作用位点

两者同属核酸酶,只是切割核酸的方式不一样而已。凡能从多核苷酸链的末端开始水解核酸的酶称为核酸外切酶，凡能从多核苷酸链中间开始水解核酸的酶称为核酸内切酶。而能识别特定的核苷酸顺序,并从特定位点水解核酸的内切酶称为限制性核酸内切酶(限制酶）。

外切酶的作用位点

Tm值适当高一些。现在大部分测序反应均选用耐热的测序级DNA聚合酶 来催化，并采用PCR的热循环程序。选用Tm值稍高一些，甚至退火温度 接近酶的最佳延伸温度的引物，有助于使反应顺利跨过待测模板的二级结构区，也有助于降低非特异反应。

引物5’端引入限制性内切酶 位点：

自从发现 Taq 酶具有非模板依赖的在新生成DNA链的3’末端加上一个A的特性以来，在引物5’端引入酶切位点从而方便后续克隆 步骤的方法的应用大大减少，取而代之的是利用带T载体 的粘端连接来包装PCR产物。若实验需要在引物5’端引入相关酶切位点时，除了需要清楚所选用的酶的识别序列之外，还需要了解此酶是否有位点优势效应，即酶的活性是否因为识别位点在序列的不同位置而不同，并根据此点来选择5’末端的保护碱基。此外保护碱基的另外一个作用就是保护酶切位点不被Taq 酶具有的微弱的5’→3’外切酶活性破坏。

外切酶的作用是

DNA聚合酶I为单链多肽，分子量109ku，有四种活性。（1）5′→3′DNA聚合酶活性：反应底物为单链DNA及引物（带3′-OH基）或5′突出的双链DNA。

（2）5′→3′外切核酸酶活性：反应底物是双链DNA或DNA∶RNA杂交体，它可从5′端降解双链DNA，也降解RNA∶DNA中的RNA（RNase：H活性）。

（3）3′→5′外切酶活性：反应底物是带3′-OH的双链DNA或单链DNA，其活性从3′-OH端降解DNA，可被5′→3′聚合活性封闭，也可被带5′磷酸的dNMP所抑制。

（4）交换（置换）反应：如果只有一种dNTP存在，3′→5′外切活性将从3′-OH端降解DNA，然后在该位置发生一系列连续的合成和外切反应，直到露出与该dNTP互补的碱基。

总之，在没有dNTP的情况下，外切活性占主导地位，而当存在足够的dNTP时，外切活性和合成活性将处在动态平衡中，结果使得双链DNA成为平末端。

外切酶活性有什么用

(一)切口平移法(nick translation)标记双链DNA探针

当双链DNA分子的一条链上产生切口时，E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可将核苷酸连接到切口的3?蒺羟基末端。同时该酶具有从5?蒺→3?蒺的核酸外切酶活性，能从切口的5?蒺端除去核苷酸。由于在切去核苷酸的同时又在切口的3?蒺端补上核苷酸，从而使切口沿着DNA链移动，用放射性核苷酸代替原先无放射性的核苷酸，将放射性同位素掺入到合成新链中。最合适的切口平移片段一般为50～500bp。

外切酶内切酶

DNase和RNase统称核酸酶，简称核酶。(包括外切和内切，不过我记得的RNase好像没有内外之分，都是外切的)

提纯DNA会用到RNA酶，这是利用了酶催化作用的底物专一性。因为DNA和RNA在C2位置上分子结构不同(DNA在此处少一个羟基)，RNase只识别并催化RNA的水解，不对DNA有催化水解的作用。所以，使用RNase提纯DNA，是为了将核酸提取中与DNA混在一起的RNA水解掉，达到纯化的目的。

外切酶作用位点是什么

能够将聚核苷酸链的磷酸二酯键切断的酶，称为核酸酶。核酸酶属于水解酶，作用于磷酸二酯键的P-O位置。

核酸酶是在核酸分解的第一步中，作用于水解核苷酸之间的磷酸二酯键的一种酶。在高等动植物中都有作用于磷酸二酯键的

不同来源的核酸酶，其专一性、作用方式都有所不同。有些核酸酶只能作用于RNA，称为核糖核酸酶（RNase），有些核酸酶只能作用于DNA，称为脱氧核糖核酸酶（DNase），有些核酸酶专一性较低，既能作用于RNA也能作用于DNA，因此统称为核酸酶（nuclease）。根据核酸酶作用的位置不同，又可将核酸酶分为核酸外切酶（exonuclease）和核酸内切酶（endonuclease）。

5→3外切酶作用

羧肽酶(Carboxypeptidases, CPs)是一种 专一性地从肽链的C端逐个降解、释放游离氨基酸的一类肽链外切酶。羧肽酶A、B是一种消化酶。可专一性地从肽链的C端开始逐个降解，释放出游离氨基酸的一类肽链外切酶。以酶原形式存在于生物体内。常用的有A、B、C及Y ，4种羧肽酶。

外切酶一

区别就是两者意思是不一样，具体的不同如下

plog中文意思是网络流行语，以vlog派生的词汇（photo-log），顾名思义是以图片以及照片的形式记录生活以及日常。

polg中文意思是线粒体聚合酶γ(POLG)基因编码的蛋白质具有DNA聚合酶、3-5'核酸外切酶和5'dRP裂解酶等活性。