引物的作用是提供(引物的作用是什么高中生物)
引物的作用是什么高中生物
PCR技术的基本原理
⑴PCR技术的基本原理:该技术是在模板DNA、引物和四种脱氧核糖核苷酸存在下,依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应。DNA聚合酶以单链DNA为模板,借助一小段双链DNA来启动合成,通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链DNA模板中的一段互补序列结合,形成部分双链。在适宜的温度和环境下,DNA聚合酶将脱氧单核苷酸加到引物3?OH末端,并以此为起始点,沿模板5础?捶较蜓由欤铣梢惶跣碌腄NA互补链。
PCR反应的基本成分包括:模板DNA(待扩增DNA)、引物、4种脱氧核苷酸(dNTPs)、DNA聚合酶和适宜的缓冲液。类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:①模板DNA的高温变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;②模板DNA与引物的低温退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;③引物的适温延伸:DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链重复循环变性-退火-延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2~4分钟,2~3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
引物组成
Bp指的是碱基。正常情况下,dna是由脱氧核糖核苷酸组成,一个bp就代表一个碱基,既是一个脱氧核糖核苷酸。
引物都有什么
通用引物:一般是指某基因外围保守序列。虽然这个基因可能是序列多变的,(如同功酶),但两侧翼序列则是保守的。利用俩侧翼保守序列设计出来的引物,称为通用引物。有M13、T7、T3、Sp6
引物的作用原理
不是的,这是两个不同的概念:启动子:是指转录起始复合物结合的一段DNA序列引物:是DNA复制时,用于结合DNA一段序列具体正确的描述可以去生化书上查肯定是有的
引物是干什么用的
引物就是为了增幅目的DNA而导入的短小DNA片断,在PCR反应中,新合成的DNA是要接在引物上才能继续按照模版DNA复制.引物的设计因需要增幅的序列而不同.举个例子来说,你要增幅如下序列: accctcccgccccccccgtat (互补碱基不写了) 那么一般来说,你就要导入以accctc结尾的引物使得增幅继续下去,具体方法和注意事项楼主可以看gee_an大侠的资料. 查了一下测序公司的网页,如果要同定微生物,楼主需要准备如下东东:
1、待测菌体.试管或培养皿都可以,但必须是纯粹的待测菌体,不能含有其他的微生物.
2、提纯的DNA.如果1有致病性或传染性,那么楼主就得自己提纯DNA再交给测序公司.DNA纯度要求可以做PCR.
引物的概念
引物是指化学本质为单链DNA、可与待扩增的DNA两侧碱基互补的寡核苷酸片段,其设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段,使其能有效地扩增模板DNA序列。引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否,具体的设计原则包括:
1、引物长度一般在15-30bp。常用的为18-27bp,因为过长会导致其延伸温度大于74℃,不适于Taq DNA聚合酶进行反应。
2、引物GC含量一般为40%-60%, 45-55%为宜,GC含量过高或过低都不利于引发反应,上下游引物GC含量和Tm值要保持接近,一般Tm值不超过5℃。
3、引物所对应的模板序列的Tm值在55-80℃之间,最好为72℃左右。
4、引物的延伸是从3′端开始的,不能进行任何修饰,且 3’端的碱基一般不用A;引物3’端出现3个以上的连续碱基,如GGG或CCC,或者引物3’端的互补、二聚体或发夹结构也可能导致PCR反应失败。
5、碱基要随机分布,且引物自身和引物之间不能有连续4个碱基的互补。
6、尽量在基因的编码区(CDS序列)上设计引物,限制基因组DNA扩增。
7、使用BLAST检索,确认引物特异性。