sds在上样中的作用(sdspage上样)
sdspage上样
十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS Page）是一种用于分离蛋白质的凝胶电泳。当使用凝胶电泳分离蛋白质时，需要进行特殊处理，因为蛋白质不像 DNA 和 RNA 那样带负电，也不会向正端或负端迁移。因此，在凝胶电泳之前，蛋白质会变性并带有负电荷。它是使用一种称为十二烷基硫酸钠 (SDS) 的清洁剂来完成的。使用 SDS 和聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的凝胶电泳称为SDS Page。这种技术常用于生物化学、遗传学、法医学和分子生物学。
sdspage上样缓冲液加多了
4×和5×的上样缓冲液的区别就是加样的比例不一样。 4×上样缓冲液使用方法： 1、按每30微升蛋白样品加入10微升上样缓冲液的比例（4倍稀释）来使用。如果蛋白浓度过高，可用双蒸水稀释。 2、混匀后，100℃水浴加热5-10分钟，使蛋白变性。 3、冷却至室温后，10000-14000rpm离心2-5分钟，取上清直接上样电泳即可。 5×上样缓冲液使用方法： 1.在室温或不超过37℃的水浴中溶解SDS-PAGE上样缓冲液（5X）。水浴溶解后立即室温存放，尽量避免长时间置于水浴中。 2.按照每4微升蛋白样品加入1微升蛋白上样缓冲液（5X）的比例，混合蛋白样品和蛋白上样缓冲液（5X）。 3.100℃或沸水浴加热3-5分钟，以充分变性蛋白。 4.冷却到室温后，直接上样到SDS-PAGE胶加样孔内即可。 5.通常电泳至蓝色染料到达胶的底端处附近即可停止电泳。
sdspage上样缓冲液成分
需要注意加样时，不要加的太多，最多只加样品孔的2/3即可。其次，一定要使每个孔的样品量保持一致，不能够有差异，要不然会导致结果不准确。
sdspage上样后很快扩散
SDS是阴离子去污剂，作为变性剂和助溶试剂，它能断裂分子内和分子间的氢键，使分子去折叠，破坏蛋白分子的二、三级结构。
而强还原剂如巯基乙醇，二硫苏糖醇能使半胱氨酸残基间的二硫键断裂。在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后，分子被解聚成多肽链，解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白- SDS胶束，所带的负电荷大大超过了蛋白原有的电荷量，这样就消除了不同分子间的电荷差异和结构差异。sdspage上样缓冲液作用
胶板放到袋子里，灌点电泳缓冲液，4度放一周没有问题， 或者灌好胶等它凝结好了以后，可以和玻璃板一块放在4度保存的，4天应该没什么问题。 但是如果没什么特殊事情建议还是马上就做实验的好！因为胶是有热胀冷缩现象的。