pcr中缓冲液的作用(pcr反应体系中的缓冲液相当于细胞中的体验)
pcr反应体系中的缓冲液相当于细胞中的体验
PCR反应中缓冲液是一个重要的影响因素，特别是其中的Mg2+能影响反应的特异性和扩增片段的产率。目前最为常用的缓冲体系为l0～50mmol／L的Tris—HCl(pH8．2～8．3，20℃)，PCR标准缓冲液含有10mmol／L的Tris—HCl(pH8．3)、50mmol／L的KCl、1．5mmol／L的Mg2+、0.1g／L的明胶。在一般的PCR反应中，1．5～2．0μmol／L Mg2+是比较合适的(对应dNTP浓度为200μmol／L左右)。Mg2+过量能增加非特异扩增并影响产率。
现在认为限制KCl和明胶的用量值得提倡，尤其是BSA，虽其对酶有一定保护性，如果质量不好将起相反的作用，建议使用乙酰化的BSA。KCl在50mmol／L时能促进引物退火，大于此浓度时将会抑制聚合酶的活性。有的反应液以氯化铵或醋酸铵中的NH+才代替K+，其浓度为16．6mmol／L。
在PCR中使用10～50mmol／L Tris HCl，主要靠其调节pH使Taq DNA聚合酶的作用环境维持偏碱性。Tris缓冲液是一种双极化离子缓冲液，pKa为8．3(20℃)，△pKa为一0.021／℃。
在反应体系中加入适量(10％)的二甲基亚砜(DMSO)，虽然DMSO对聚合酶活性有一定抑制作用，但它可减少模板二级结构，提高PCR反应特异性。有报道指出甲酰胺或氯化四甲基铵(TMAC)均可提高反应特异性，而对酶活性没有明显影响。
PCR标准缓冲液对大多数模板DNA及引物都是适用的，但对某一特定模板和引物的组合，标准缓冲液并不一定就是最佳条件，因此各实验室可在此条件上，根据具体扩增项目进行改进。其中Mg2+浓度对扩增作用的特异性和产量有明显影响。Taq酶是一种Mg2+依赖酶，Mg2+浓度一般为1．5mmol／L左右，Mg2+浓度过低时，酶活力明显降低；过高时，酶可催化非特异性扩增。由于反应体系中的DNA模板、引物和dNTP都可能与Mg2+结合，因此降低了Mg2+的实际浓度。所以建议反应中Mg2+用量至少要比dNTP浓度高O．5～1．0mmol／L。
pcr技术中的缓冲液
基本常识 PCR包括7种基本成分：模板DNA、特异性引物、热稳定DNA聚合酶、脱氧核苷三磷酸（dNTP）、二价阳离子、缓冲液及一价阳离子。
其中缓冲液：一般使用Tris-Cl缓冲液，标准的为10mmol/L,并将其调节到8.3~8.8之间 配制方法（二种）： 0.1mol/L Tris-Cl(1000mL) Tris碱 12.11g；ddH2O 800mL；HCl 49mL 三者混匀充分溶解后，滴加浓盐酸调pH至8.0，定溶至1000mL 0.01mol/L Tris-Cl(1000mL) Tris碱 1.211g；ddH2O 800mL；HCl 49mL 三者混匀充分溶解后，滴加浓盐酸调pH至8.0，定溶至1000mL 各成分作用： Tris 本身是一级胺，其 pKa 为 8 因此在 pH 7.5~8.5 有良好的缓冲能力 CL- 有一定的弱酸性pcr反应缓冲液的成分
PCR反应需要加镁离子，并且镁离子浓度的总量应该比dNTPs的浓度高，常用1.5mmol/L。
镁离子是加在PCR反应的缓冲液中的，成分是最复杂的，除水外一般包括四个有效成分：
1、缓冲体系，一般使用HEPES或MOPS缓冲体系；
2、一价阳离子，一般采用钾离子，但在特殊情况下也可使用铵根离子；
3、二价阳离子，即镁离子，根据反应体系确定，除特殊情况外不需调整；
4、辅助成分，常见的有DMSO、甘油等，主要用来保持酶的活性和帮助DNA解除缠绕结构。
缓冲液的目的是提供合适的酸碱度与某些离子，而PCR反应五要素是：引物(PCR引物为DNA片段，细胞内DNA复制的引物为一段RNA链）、酶、dNTP、模板和缓冲液（其中需要Mg2+）。
pcr缓冲溶液的主要作用
缓冲液有聚合酶需要的镁离子，还可以使反应体系处于酶反应时适合的PH，实际上就是给酶创造一个最适合的反应环境以使它的活性能达到最佳状态，如果你不加buffer，酶是没有活性的。一般酶和缓冲液是配套的，买酶的时候是在一起的
pcr缓冲液为什么缓慢融化
逆转录PCR（Reverse Transcription PCR，RT-PCR）是一种将RNA转录成cDNA，再进行PCR扩增的技术。以下是逆转录PCR的详细步骤：
1. RNA提取：从样品中提取RNA，可以使用商业化RNA提取试剂盒或手工提取方法。
2. 逆转录反应：将RNA转录成cDNA，需要使用逆转录酶和引物。逆转录酶可以是M-MLV逆转录酶或AMV逆转录酶等，引物可以是随机引物或特异性引物。逆转录反应的条件包括温度、时间和反应体系等，需要根据实验目的和样品特点进行优化。
3. PCR扩增：将逆转录反应产生的cDNA作为模板，使用特异性引物进行PCR扩增。PCR扩增的条件包括温度、时间和反应体系等，需要根据引物特点和模板浓度进行优化。
4. PCR产物分析：可以使用凝胶电泳、实时荧光定量PCR等方法对PCR产物进行分析和检测。
需要注意的是，逆转录PCR技术需要注意RNA的质量和纯度，避免RNA降解和污染对实验结果的影响。同时，逆转录反应和PCR扩增的条件需要进行优化，以获得高效、特异性和稳定的PCR产物。
pcr反应体系中的缓冲液相当于细胞中的体验液吗
PCR反应需要加镁离子，并且镁离子浓度的总量应该比dNTPs的浓度高，常用1.5mmol/L。 镁离子是加在PCR反应的缓冲液中的，成分是最复杂的，除水外一般包括四个有效成分：
1、缓冲体系，一般使用HEPES或MOPS缓冲体系；
2、一价阳离子，一般采用钾离子，但在特殊情况下也可使用铵根离子；
3、二价阳离子，即镁离子，根据反应体系确定，除特殊情况外不需调整；
4、辅助成分，常见的有DMSO、甘油等，主要用来保持酶的活性和帮助DNA解除缠绕结构。 缓冲液的目的是提供合适的酸碱度与某些离子，而PCR反应五要素是：引物(PCR引物为DNA片段，细胞内DNA复制的引物为一段RNA链）、酶、dNTP、模板和缓冲液（其中需要Mg2+）。
pcr缓冲液相当于细胞内什么成分
PCR反应体系由寡核苷酸(引物)、4 种dNTP、Taq DNA聚合酶、靶序列DNA和PCR反应缓冲液体系组成。
设计PCR引物时的一般原则：
(1)引物长度一般15~ 30碱基，过短则特异性低; 过长则会引起引物间的退火而影响有效扩增。
(2) 避免内部二级结构，避免序列内有较长的回文结构，使引物自身不能形成发夹结构。
(3) G/C 和A/T 碱基均匀分布，G/C 含量在45%~ 55% 之间，引物碱基序列尽可能选择碱基随机分布，避免嘌呤、嘧啶的连续排列。
(4) 要避免两个引物间特别是3' 末端DNA 序列互补以及同一引物自身3' 末端的序列互补，使它们不能形成引物二聚体或发卡结构。
(5) 引物3' 端碱基一般应与模板严格配对，并且3' 端为G、C 或T 时引发效率较高。