煌绿乳糖胆盐的作用(煌绿乳糖胆盐肉汤作用)
煌绿乳糖胆盐肉汤作用
煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB)
原 理：
蛋白胨提供碳氮源；乳糖是可发酵的糖类；牛胆粉和煌绿抑制非肠杆菌科细菌。
用 途：用于食品中大肠菌群的检测
配方（每升）：
蛋白胨
10g
乳糖
10g
牛胆粉
20g
煌绿
0.0133g
终pH7.2±0.2
使用方法：
1、称取本品40g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装于带有小倒管的试管中，121℃高压灭菌15min，待冷至常温，备用。
2、样品的处理及稀释。略。
3、将LST肉汤产气管用直径为3mm的接种环移种至煌绿乳糖胆盐肉汤管中。
4、将试管放入到培养箱中36±1℃培养24h。
5、观察结果。按产气管数，查MPN表报告每克(mL)样品中大肠菌群的MPN值
煌绿乳糖胆盐肉汤原理
称取乳糖胆盐发酵培养基35克(单料)或70克(双料)加入蒸馏水或去离子水1 L,搅拌加热煮沸至完全溶解,分装于带有小倒管的试管中,培养基每管10mL,115℃高压灭菌20min。
煌绿乳糖胆盐灭菌后变色了
配制方法：
1、称取本品40g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装于带有小倒管的试管中，121℃高压灭菌15min，待冷至常温，备用。
2、样品的处理及稀释。略。
3、将LST肉汤产气管用直径为3mm的接种环移种至煌绿乳糖胆盐肉汤管中。
4、将试管放入到培养箱中36±1℃培养24h。
5、观察结果。按产气管数，查MPN表报告每克(mL)样品中大肠菌群的MPN值
黄绿乳糖胆盐发酵管
乳糖胆盐发酵培养基和乳糖复发酵培养基：产酸产气，培养基变黄，摇动有气泡升起或者倒管中有气泡。 EMB上，简单判定，只要有黑心或者有绿色金属光泽的菌落几乎就是大肠菌群。没把握就去革兰氏染色和复发酵鉴定。
煌绿乳糖胆盐肉汤怎么使用
一、目的
本产品用于大肠菌群的确证试验，非肠杆菌科细菌在此培养基中生长被抑制。
二、实验原理
蛋白胨提供微生物生长所需的碳氮源；乳糖是可发酵的糖类；煌绿是一种具有抑菌能力的染料，牛胆粉和煌绿抑制非肠杆菌科细菌
复发酵为什么用煌绿乳糖胆盐发酵管
大肠菌群测定的操作细则 大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
该菌主要来于人畜粪便,故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量,推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。
食品中大肠菌群数系以100mL(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。
1 设备和材料 1.1 温箱：36±1℃。
1.2 冰箱:0～4℃。
1.3 恒温水浴 :44.5±0.5℃。
1.4 天平。
1.5 显微镜。
1.6 均质器或乳钵。
1.7 平皿:直径为90mm。
1.8 试管。
1.9 吸管。
1.10 广口瓶或三角烧瓶:容量为500mL。
1.11 玻璃珠:直径约5mm。
1.12 载玻片。
1.13 酒精灯。
1.14 试管架。
2 培养基和试剂 2.1 乳糖胆盐发酵管:按GB 4789.28中4.9规定。
2.2 伊红美蓝琼脂平板:按GB 4789.28中4.25规定。
2.3 乳糖发酵管:按GB 4789.28中4.10规定。
2.4 EC 肉汤:按GB 4789.28中4.11规定。
2.5 磷酸盐缓冲稀释液:按GB 4789.28中3.22规定。
2.6 生理盐水。
2.7 革兰氏染色液:按GB 4789.28中2.2规定。
3 操作步骤 3.1 检样稀释 3.1.1 以无菌操作将检样25mL(或g)放于有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内予置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内,经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液。
固体检样最好用均质器,以8 000-10 000 r/min的速度处理1min,做成1:10的均匀稀释液。
3.1.2 用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL,注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内,振摇试管混匀,做成1:100的稀释液。
3.1.3 另取1mL灭菌吸管,按上条操作依次做10倍递增稀释液,每递增稀释一次,换用1支1mL灭菌吸管。
3.1.4 根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计,选择三个稀释度,每个稀释度,接种3管。
3.2 乳糖发酵试验 将待检样品接种于乳糖 胆盐发酵管内,接种量在1mL以上者,用双料乳糖胆盐发酵管,1mL及1mL以下者,用单料乳糖胆盐发酵管。
每一稀释度接种3管,置36±1℃ 温箱内,培养24±2h,如所有乳糖胆盐发酵管都不产气,则可报告为大肠菌群阴性,如有产气者,则按下列程序进行。
3.3 分离培养 将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上,置36±1℃ 温箱内,培养18-24h,然后取出,观察菌落形态,并做革兰氏染色和证实试验。
3.4 证实试验 在上述平板上,挑取可疑大肠菌群菌落1-2个进行革兰氏染色,同时接种乳糖发酵管,置 36±1℃温箱内培养24±2h,观察产气情况。
凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌,即可报告为大肠菌群阳性。
3.5 报告 根据证实为大肠菌群阳性的管数,查MPN检索表,报告每100mL(g)大肠菌群的MPN值。
4 粪大肠菌群(faecal coliform) 4.1 用接种环将所有产气的乳糖胆盐发酵管培养物(见3.2条)转种于EC肉汤管内,置44.5±0.2℃水浴箱内(水浴箱内的水面应高于EC肉汤液面),培养24±2h,经培养后,如所有EC肉汤管均不产气,则可报告为阴性;如有产气者,则将所有产气的EC肉汤管分别转种于伊红美蓝琼脂平板上,置 培养18-24h,凡平板上有典型菌落者,则证实为粪大肠菌群阳性。
4.2 结果报告 根据证实为粪大肠菌群的阳性管数,查MPN检索表,报告每100mL(g)粪大肠菌群的MPN值。
若有较多典型大肠菌群菌落，革兰氏染色为阴性，即可直接判定为阳性。
若少或均不够典型，应多挑选菌落作证实实验，以免出现假阴性。
SN/T 1897-2007食品中菌落总数的测定也可以用于与食品接触的设备表面的。
附录A。
另有自定的 例一： 物体表面采样及检查方法 采样面积 被采表面＜100cm2，取全部表面；被采表面≥100cm2，取100cm2。
采样方法 用5×5cm2的标准灭菌规格板；放在被检物体表面，用浸有无菌生理盐水液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返各涂抹5次；并随之转动棉拭于。
连续采样1～4个规格板面积；剪去手接触部分，将棉拭于放入装10ml采样液的试管中送检。
门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体的方法采样。
培养（略）
煌绿乳糖胆盐肉汤中,煌绿,乳糖,胆盐分别起什么作用?
胆盐能抑制革兰氏阳性菌等杂菌生长.在初发酵，培养基已经加入胆盐抑制革兰氏阳性菌生长，并在EMB培养基上进行分离培养，因此复发酵培养时无需乳糖发酵管，以免大肠菌肠受到抑制。
用溴甲酚紫作指示剂，该指示剂中性时呈蓝紫色，酸性时呈黄色，大肠杆菌能分解乳糖产酸产气，因此乳糖胆盐发酵管里溶液颜色变成黄色和产生气泡。
胆盐的作用：胆盐对很多杂菌有抑制作用，但是对大肠杆菌不造成影响。