层析柱的作用(层析柱的用途)

层析柱的用途

亲和层析的原理是依靠固定相和目标组分的特异性结合来高效分离目标组分的层析技术。

步骤是先将样品通过装有固定相的层析柱，这时样品中的目标物质会和固定相特异性结合，然后冲洗柱去除杂质，再用竞争性物质冲洗柱子，将目标组分洗脱下来，即可获得纯净的目标物质。 影响层析效果的因素：固定相和目标样品的亲和度、温度、离子强度、竞争性洗脱液的竞争性等。

层析柱的原理

阴离子交换色谱就是基质上带有阳离子功能基，然后淋洗液中的阴离子与功能基阳离子之间因静电作用力结合，待测样品与淋洗液一起经过柱子时，就会因待测阴离子与功能基阳离子的静电作用力比淋洗液阴离子更强而被交换，不同待测离子因结合力不同而被洗脱。

层析柱的使用方法及注意事项

可以用适量的有机溶剂润洗一下层析柱，柱子体积较小的话就用玻璃棒搅匀排除一下气泡。

不管是干柱和湿柱，都要加层析液，不能要求一开始就没有气泡的。要用洗脱剂不停的洗脱，就是用配置好的试剂一边一边对柱子进行洗脱，这样不但可以消除气泡，还可以使硅胶充分沉降，让层析效果更好。等柱子没有气泡后在上样用洗脱液进行层析。

层析柱的认识及装填

先进行薄层层析，一般是Rf值在0.3-0.5之间为最佳的极性洗脱剂，此时可以兼顾分离度和过柱的时间

层析柱的构造

常用液相色谱填料的粒径有：1.8um、3um、5um，这些一般是用在分析柱上的。 还有：10um、15um、20um、40um这些一般是用在制备色谱柱上的。 还有无定形填料。“色谱世界”有个色谱填料的专栏。资料很详细，你可以去看看。

层析柱原理图

柱层析原理:

柱层析法的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而使各组分分离。一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附，极性较弱的物质不易被硅胶吸附。

当采用溶剂洗脱时，发生一系列吸附→解吸→再吸附→再解吸的过程，吸附力较强的组分，移动的距离小，后出柱；吸附力较弱的组分，移动的距离大，先出柱。

硅胶柱层析流动相：

极性小的用乙酸乙酯：石油醚系统；极性较大的用甲醇：氯仿系统；极性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系统；拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸

一般都是利用极性相似相容原理，看流动相与固定相的极性，大部分是固定相的极性小于流动相，然后流动相的极性与所要洗脱的物质极性比较接近，从而将物质洗脱下来。

层析柱介绍

凝胶层析又称凝胶过滤，是一种按分子量大小分离物质的层析方法。该方法是把样品加到充满着凝胶颗粒的层析柱中，然后用缓冲液洗脱。大分子不能进入凝胶颗粒中的静止相中，只留在凝胶颗粒之间的流动相中，因此以较快的速度首先流出层析柱，而小分子则能自由出入凝胶颗粒中，并很快在流动相和静止相之间形成动态平衡，因此就要花费较长的时间流经柱床，从而使不同大小的分子得以分离。