营养琼脂培养基中成分作用(营养琼脂培养基的配方)
营养琼脂培养基的配方
1、配制溶液
向容器内加入所需水量的一部分,按照培养基的配方,称取各种原料,依次加入使其溶解,最后补足所需水分。对蛋白胨、肉膏等物质,需加热溶解,加热过程所蒸发的水分,应在全部原料溶解后加水补足。
配制固体培养基时,先将上述已配好的液体培养基煮沸,再将称好的琼脂加入,继续加热至完全融化。并不断搅拌,以免琼脂糊底烧焦。
2、调节pH值
用pH试纸(或pH电位计、氢离子浓度比色计)测试培养基的pH值,如不符合需要,可用10%HCl或10%NaOH进行调节,直到调节到配方要求的pH值为止。
3、过滤
用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好的培养基过滤。用纱布过滤时,最好折叠成六层,用滤纸过滤时,可将滤纸折叠成瓦棱形,铺在漏斗上过滤。
4、分装
已过滤的培养基应进行分装。如果要制作斜面培养基,须将培养基分装于试管中。如果要制作平板培养基或液体、半固体培养基,则须将培养基分装于锥形瓶内。
分装时,一手捏松弹簧夹,使培养基流出,另一只手握住几支试管或锥形瓶,依次接取培养基。分装时,注意不要使培养基粘附管口或瓶口,以免浸湿棉塞引起杂菌污染。
装入试管的培养基量,视试管和锥形瓶的大小及需要而定。一般制作斜面培养基时,每只15×150毫米的试管,约装3~4毫升(1/4~1/3试管高度),如制作深层培养基,每只20×220毫米的试管约装12~15毫升。每只锥形瓶装入的培养基,一般以其容积的一半为宜。
5、加棉塞
分装完毕后,需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是过滤空气,避免污染。棉塞应采用普通新鲜、干燥的棉花制作,不要用脱脂棉,以免因脱脂棉吸水使棉塞无法使用。
制作棉塞时,要根据棉塞大小将棉花铺展成适当厚度,揪取手掌心大小一块,铺在左手拇指与食指圈成的圆孔中,用右手食指插入棉花中部,同时左手食指与姆指稍稍紧握,就会形成1个长棒形的棉塞。
棉塞作成后,应迅速塞入管口或瓶口中,棉塞应紧贴内壁不留缝隙,以防空气中微生物沿皱折侵入。棉塞不要过紧过松,塞好后,以手提棉塞、管、瓶不下落为合适。棉塞的2/3应在管内或瓶内,上端露出少许棉花便于拔取。塞好棉塞的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆札,准备灭菌。
6、制作斜面培养基和平板培养基
培养基灭菌后,如制作斜面培养基和平板培养基,须趁培养基未凝固时进行。
扩展资料
培养基的配置原则:
1、选择适宜的营养物质
总体而言,所有微生物生长繁殖均需要培养基含有碳源、氮源、无机盐、生长因子、水及能源,但由于微生物营养类型复杂,不同微生物对营养物质的需求是不一样的,因此首先要根据不同微生物的营养需求配制针对性强的培养基。
2、营养物质浓度及配比合适
培养基中营养物质浓度合适时微生物才能生长良好,营养物质浓度过低时不能满足微生物正常生长所需,浓度过高时则可能对微生物生长起抑制作用,例如高浓度糖类物质、无机盐、重金属离子等不仅不能维持和促进微生物的生长,反而起到抑菌或杀菌作用。
3、控制pH条件
培养基的pH必须控制在一定的范围内,以满足不同类型微生物的生长繁殖或产生代谢产物。各类微生物生长繁殖或产生代谢产物的最适pH条件各不相同,一般来讲,细菌与放线菌适于在pH7-7.5范围内生长,酵母菌和霉菌通常在pH4.5-6范围内生长。
4、控制氧化还原电位(redox potential)
不同类型微生物生长对氧化还原电位(F)的要求不一样,一般好氧性微生物在F值为+0.1V以上时可正常生长,一般以+0.3一+0.4V为宜,厌氧性微生物只能在F值低于+0.1V条件下生长,兼性厌氧微生物在F值为+0.1V以上时进行好氧呼吸,在+0.1V以下时进行发酵。
5、原料来源的选择
在配制培养基时应尽量利用廉价且易于获得的原料作为培养基成分,特别是在发酵工业中,培养基用量很大,利用低成本的原料更体现出其经济价值。
6、灭菌处理
要获得微生物纯培养,必须避免杂菌污染,因此对所用器材及工作场所进行消毒与灭菌。对培养基而言,更是要进行严格的灭菌。对培养基一般采取高压蒸汽灭菌,一般培养基用1.05kg/cm2,121.3℃条件下维持15-30min可达到灭菌目的。
参考资料来源:
营养琼脂培养基配方价格
呵呵,区别是琼脂培养基就是加了琼脂粉凝结成固体的LB培养基。固体的培养基用于细菌涂板,抗性筛选挑选单克隆之用液体的用于单克隆菌种扩大培养,提取目的基因或者蛋白之用。
营养琼脂培养基的制备方法
①马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA):马铃薯(去皮)200g,葡 萄糖 20g。琼脂 20g,水 1000ml,{如果需要配制 250ml 的培 养基,那么马铃薯、葡萄糖、琼脂的比例是 50:5:5},也可用蔗 糖取代葡萄糖,即为 PSA 培养基。还可以添加磷酸二氢钾 3g, 硫酸镁 1.5g,维生素 B1 10 ㎎,即为马铃薯综合培养基。广泛 适用于各种食用菌母种的分离,培养和保藏。
②马铃薯玉米粉培养基:马铃薯(去皮)200g,蔗糖 20g,玉米 粉 50g,琼脂 20g,磷酸二氢钾 1g,硫酸镁 0.5g,水 1000ml。 本配方适合于香菇、黑木耳、猴头菌的培养。
③马铃薯黄豆粉培养基:马铃薯 200g,蔗糖 20g,琼脂 20g,黄 豆粉 20g。
营养琼脂培养基的制备原理
YPD 或YEPD,:Yeast Extract Peptone Dextrose Medium(1L),又叫酵母浸出粉胨葡萄糖培养基,加入琼脂的又叫酵母膏胨葡萄糖(YPD)琼脂培养基
用于酵母菌的培养
配方:1% Yeast Extract(酵母膏) ,2% Peptone(蛋白胨) ,2% Dextrose (glucose)(葡萄糖),若制固体培养基,加入2%琼脂粉
配制方法:
1 溶解10gYeast Extract(酵母膏), 20gPeptone(蛋白胨)于900ml水中,如制平板加入20g琼脂粉
2 高压 115 度 15min
3 加入100ml 20gDextrose (glucose)(葡萄糖),(葡萄糖溶液灭菌后加入)
注:葡萄糖,yeast extract ,peptone溶液混合后在高温下可能会发生化学反应,导致培养基成分变化,所以要分别灭菌后再混合。葡萄糖可以过滤除菌,也可以115℃ 15min灭菌。
YPD另外一种配方:
2%Trypton(胰化胨或称胰蛋白胨)、2%Dextrose (glucose)(葡萄糖),若制固体培养基,加入2%琼脂粉,115℃ 15min灭菌。液体YPD培养基可常温保存;琼脂YPD平板在 4℃可保存几个月。加入Zeocin 100ug/ml,成为YPDZ培养基,可以4℃条件下保存1~2 周。
YPEG:除了用3%乙醇和3%甘油代替葡萄糖作为碳源外,其他成分同YPD
YPDZ 是在YPD的基础上加上ZEOCIN抗生素。
YPDA 是在YPD的基础上加0.003%的腺嘌呤硫酸盐
营养琼脂培养基的配制方法
20g蛋白胨,10g酵母抽提物,2g葡萄糖适量双蒸水溶解,15mL百分之零点二腺嘌呤溶液,定容到1L,120℃高压灭菌15分钟,室温贮存!
固体部分:YPDA液体培养基中加入2%的琼脂粉,120℃高压灭菌小15分钟,铺板,待凝固后4℃贮存。
营养琼脂培养基的配方比例
酵母菌是一种常见的单细胞真菌,被广泛应用于生物学实验中。酵母菌培养液的配制方法如下:
材料:
- 酵母菌粉末
- 葡萄糖
- 没食子酸钠
- 氨基酸液
- 蒸馏水
步骤:
1. 取适量的酵母菌粉末,加入到100毫升的蒸馏水中,搅拌均匀,使其充分溶解。
2. 加入2克葡萄糖和1克没食子酸钠,继续搅拌。
3. 加入1毫升氨基酸液,继续搅拌。
4. 将溶液转移到培养瓶中,加入适量的蒸馏水,使总体积为1升,混合均匀。
5. 调节溶液的pH值为5.5-6.0。
6. 对培养液进行高压灭菌处理,或在121℃高温下压力下进行灭菌。
7. 培养液已经配制完成,可以用于酵母菌的培养。
注意事项:
1. 在配制培养液时,应该保持环境和设备的清洁卫生,以避免杂菌污染。
2. 在使用培养液时,应该注意消毒操作,避免外界杂菌污染。
3. 在配制培养液时,应根据实验需要调整培养液的成分和浓度,以获得最佳的实验效果。
以上是酵母菌培养液的基本配方和配制方法,具体的配制方法可能会因实验目的和实验条件的不同而有所差异。