分离胶中丙烯酰胺作用(分离胶特性)

分离胶特性

分离胶电压大。浓缩胶电压必须小，因为是为了让所有蛋白质在一个平面上。这样等到分离胶时，大家才能在同一起跑线。

分离胶配方原理

胶体不能透过半透膜。利用半透膜能透过小分子和小离子，但不能透过胶体粒子的性质从溶胶中除掉作为杂质的小分子。

就是由于这个原理，才能分离胶溶体（胶体和溶液的混合物），因为溶液的粒子半径小于1纳米；胶体是指直径在1-100纳米的分散质。

胶体是不能通过半透膜的，所以，用一般的滤纸是不能过滤出胶体的，而是用半透膜来过滤胶体的。

分离胶的成分及作用

常见的自动直线封边机主要由预热、预铣、贴边、前后齐头、上下修边、上下抛光等组成。

预热：将板材在涂胶之前加热的一种功能，目的是为了涂胶后与封边带粘贴的更加牢固。

预铣：处理板材端面的，可以避免精密锯的一些瑕疵。

贴边：将封边带粘贴到板材上并压紧。

齐头：切掉贴边后板材前后多余的封边带，使封边带与板材端面平整。

修边：修边是包括了粗修、精修、仿形修边及刮边在内的一种功能，作用是把 板材周边高出板面部分的封边带修出圆弧，让板材边缘光滑过度，使之达到美化作用。

抛光：利用软性材质抛光布轮将工作面抛出光泽，以达到更佳的效果。

分离胶的基本原理

western blot中分离胶浓度的选择取决于目的蛋白分子量

不同的分离胶浓度对不同的目的蛋白分子量的分辨率不一样，比如15%的分离胶更适合45kDa的分目的蛋白，而10%的分离胶更适合70kDa的目的蛋白

而因为western blot的膜应该是完全覆盖SDS PAGE的凝胶，所以不用太担心条带在凝胶上位置偏上活偏下

所以western blot中分离胶浓度的选择取决于目的蛋白分子量

分离胶的分离范围

根据目的蛋白的分子量大小选择不同浓度的分离胶，8%、12%和15%三种浓度的分离胶就完全可以搞定日常蛋白的测定。

一般测定100kDa分子量以上的蛋白可选择8%浓度的分离胶；测定20kDa分子量以下的蛋白可选择15%浓度的分离胶，中间的分子量可选用12%浓度的分离胶。

分离胶各成分作用

加一层水称为水封

目的是隔绝空气使催化反应快速进行，进而形成凝胶，还可使分离胶上沿平直。

并且加水后，保持分离胶表面的平整性，使浓缩胶和分离胶都处于同一水平面上。

甘氨酸是为了解离出甘氨酸根离子，甘氨酸根离子可以稳定的界面，使蛋白聚集在移动界面附近，浓缩在一起。

样品液煮沸这个问题我个人认为是可以商榷的，因为理论上煮沸可以使SDS和蛋白更快更好的结合，以便于SDS-PAGE的进行。但是有些蛋白似乎不煮沸直接上样结果更好。对于非还原Loading buffer（即不含巯基乙醇）的样品，一般是不要煮沸的。