水饱和酚的作用(水饱和酚和tris饱和酚)

水饱和酚和tris饱和酚

CTAB为十六烷基三甲基溴化铵， CTAB提取缓冲液的经典配方 Tris-HCl (pH8.0)提供一个缓冲环境,防止核酸被破坏； EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子,抑制DNase活性； NaCl 提供一个高盐环境,使DNP充分溶解,存在于液相中； Cβ-巯基乙醇是抗氧化剂,有效地防止酚氧化成醌,避免褐变,使酚容易去除基因组DNA。 CTAB 4g NaCl 16.364 g 1M Tris-HCl 20ml( PH8.0) 0.5M EDTA 8ml，先用70ml ddH2O溶解, 再定容至200ml灭菌 冷却后0.2-1% 2-巯基乙醇（400ul）氯仿-异戊醇（24：1）：先加96ml氯仿，再加4ml异戊醇，摇匀即可。

水饱和酚和tris饱和酚的区别

Tris 盐酸缓冲液

Tris 饱和酚是用Tris-HCl(pH8.0)饱和过的重蒸酚,为浅黄色透明液体,有刺激性气味,上层为 Tris 盐酸缓冲液,pH>7.8,下层为酚相,内加有抗氧化的 8-羟基喹啉。Tris 饱和酚用于分离 DNA。

若提质粒 吸收少许,也没关系!

是滴,保护酚,避免被氧化.

水饱和酚是苯酚吗

如果你是说酚氯仿瓶子里的，那上层是含有饱和TRIS的水层，下层是酚氯仿。

如果是指酚氯仿加入到DNA后混匀离心后的分层，那上层是水相，中间可能含有一点蛋白是白色的一小层，最下层是有机相。

水饱和酚溶液

白色混浊即饱和了，沉淀后取清液即可。

tris饱和酚

纯化DNA的常用方法是用酚抽提-乙醇沉淀法，适用于普通实验室操作。它通过交替使用苯酚、氯仿两种不同的蛋白质变性剂，可以增加去除蛋白质杂质的效果；氯仿可以去除核酸溶液中的微量酚，还可以加快有机相与液相混合，去除色素和蔗糖；在氯仿中加入少量的异戊醇可以减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。

【实验材料】

待纯化的DNA溶液。

【实验仪器】

高压灭菌锅，涡旋混匀器，台式高速冷冻离心机

【试剂配制】

1、Tris饱和酚（pH8.0）：氯仿：异戊醇混合液

酚：氯仿：异戊醇按体积比25：24：1配制，现配现用。

2、氯仿：异戊醇混合液

氯仿：异戊醇按体积比24：1配制，现配现用。

3、醋酸钠溶液

配制3 mol／L的醋酸钠溶液，调节pH值至5.2。

4、TE缓冲液

10 mmol／L Tris·HCl（pH 8.0），1 mmol／LEDTA（pH 8.0），配制完成后高压灭菌，4 ℃保存。

【实验步骤】

1、在待纯化的DNA溶液中加等体积的酚：氯仿：异戊醇混合液，然后在涡旋混匀器上充分混匀。

2、将混合物12000 r／min离心10 min后，移取上层含DNA的水相到另一离心管中。如果在水相和有机相交界处有白色沉淀物，则需要重新抽提水相，直到两相交界处无明显沉淀物。

3、向上层水相中加入等体积的氯仿：异戊醇（24：1）混合液，在涡旋混匀器上充分混匀后12000 r／min离心10 min。

4、移取上层含DNA的水相到另一离心管中，加1／10体积的醋酸钠溶液，充分混匀，再向管中加入2.5倍体积的预冷无水乙醇，上下倒置混匀，于-20 ℃保存30 min。

5、12000 r/min离心5 min，弃上清液；75%的乙醇12000 r/min离心洗涤5 min，弃上清液；用吸头将管壁残留的乙醇去除，室温干燥10-15 min（不要等DNA沉淀完全干燥，否则DNA不易溶解）。

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6、在盛有干燥DNA的离心管中加入适量TE缓冲液，溶解后在-20 ℃以下长期保存。