蛭弧菌的作用(蛭弧菌的作用食品加工中)

蛭弧菌的作用食品加工中

1 蛭弧菌在水产中是被禁用的。2 原因是蛭弧菌是一种能够引起人类、家畜和水产动物疾病的病原菌，对人体和动物的健康有潜在危害。此外，蛭弧菌还能导致水产养殖环境的变差，对水产养殖造成经济损失。3 因此，为保障消费者的食品安全和水产养殖的健康发展，水产养殖中禁止使用含有蛭弧菌的饲料、添加剂、消毒剂等物质。同时，加强规范管理，提高养殖水平，也是预防蛭弧菌危害的重要手段。

蛭弧菌在水产养殖中的作用

水产养殖用微生物菌大致可分为乳酸菌、芽孢杆菌（枯草芽孢和地衣芽孢）、光和细菌、酵母菌、硝化细菌、蛭弧菌和EM菌。每种菌的适用情和作用都是有区别的。

乳酸菌用于分解大分子有机物和改善肠道，芽孢用于调水量大清水量小了可以肥水，最好使用前用红糖扩培一下使用。光和细菌只能利用小分子的有机物如氨氮、硫化氢等，硝化菌是出氨氮必不可少的细菌生长周期比较缓慢，EM为复合菌主要用于调节水质稳定水质。

蛭弧菌在水产中的应用

蛭弧菌(Bdellovibrio)是寄生于其他细菌并能导致其裂解的一类细菌。它虽然比通常的细菌小，能通过细菌滤器，有类似噬菌体的作用，但它不是病毒，确确实实是一类能吃掉细菌的细菌。1962年首次发现于菜豆叶烧病假单胞菌体中，随后从土壤、污水中都分离到了这种细菌。根据其基本特性，命名为Bdellovibrio bacteriovorus。其中， Bdello一词来自希腊字,是水蛭的意思，vibrio意为弧菌，而种名bacteriovorus是 食细菌的意思。由于它们具有特殊的捕食生活方式以及有可能充当决定自然界中微生物种群变动的角色，因而引起了许多科学工作者的兴趣。

蛭弧菌怎么使用

答：是寄生在某些细菌并导致其裂解的一类细菌。蛭弧菌能防止或减少虾、蟹病害的发展和蔓延，改善虾、蟹 体内外环境，促进生长，增强免疫力。

蛭弧菌对人体有害吗

发酵实验流程：先配制18L营养肉汤液体培养基，121℃灭菌

20min。冷却后接种，由于条件所限，摇床的

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温度为30℃而非最适的37℃，180r/min，培养48小时。培养结束后，对培养液进行离心（3000r/min,10min），倒掉上清液，加入适量的生理盐水，振荡使菌泥破碎溶于液体中。重复以上过程2次后，所得即为高浓度大肠杆菌菌悬液，保藏于4℃冰箱。发酵罐用蒸馏水清洗后，加6L蒸馏水空灭一次，排掉蒸馏水。把溶氧电极浸没于新鲜配制的饱和无水亚硫酸钠溶液中，待电极显示值稳定后标零点。标定结束后将溶氧电极插入相应的传感器接口，固定连接数据线，在发酵接种前标定满度。PH电极的标定应在灭菌前进行，用PH=6.86的缓冲液标定零点，用PH=9.18的缓冲液标定斜率。标定结束后将PH电极插入相应的传感器接口，固定连接数据线。打开蒸汽发生器准备灭菌，先向外套内通如热蒸汽，等罐内温度升到100℃以上时，向罐内通

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热蒸汽使温度上升到121℃，进入灭菌记时。灭菌1800s，这个过程中通过调节蒸汽阀门和排气阀来控制罐压和罐温。灭菌流程结束后，停止向罐内通热蒸汽，同时关闭蒸汽发生器。此时发酵罐冷却过程开始，系统通过控制电磁阀的开启使冷水进入夹套，对发酵罐进行降温冷却。降温过程结束后设定发酵过程的各项参数，包括温度、转速、罐压，由于发酵罐内装的是已经调完PH的生理盐水（PH约为7），而且并未开启酸碱泵，所以设定的参数只有以上三个。温度设定为30℃，转速设定为150r/min，罐压为0.05MPa。待温度、罐压、通气量均已保持稳定正常下，以100%标定溶氧值，此时溶解氧是一个稳定的相对值。所有参数设定完毕，开始加样。把浸过酒精的火环放在加样口，点燃火环开始加样。把事先制备的保藏

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于4℃冰箱的高浓度大肠杆菌菌悬液加到发酵罐中，再加入蛭弧菌样品，旋紧加样口的金属塞，加样完毕开始发酵。加样过程中应防止染菌，最重要的是加蛭弧菌时加样应迅速通过火环，因为蛭弧菌对热很敏感，温度过高会使其灭活。

这次发酵流程一共用时72小时，每12小时取样一次。与同等时间的摇床样品共同做吸光光度值（OD值）测定，对裂解大肠杆菌的速度进行对比。但由于发酵罐取样口的总阀门有泄露现象，使取样前用于管道灭

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菌的的高压蒸汽进入发酵罐内，造成取出的样本产生较大误差，蒸汽进入发酵罐后使发酵液温度上升，对蛭弧菌生长产生不利影响。同时蒸汽管路中的铁锈也随热蒸汽进入发酵罐内，对OD值的测定产生干扰。由于高压热蒸汽进入罐内造成罐压变化，使溶氧电极所测定的溶氧值也产生不稳定的波动，PH电极测定的数值也由于同样的原因出现不正常波动，所以整个发酵过程所记录的溶氧值和PH值与真实值有很大误差，不建议采用。

由于取样口总阀门泄露造成发酵液流失严重（6min就泄露了

100ml），发酵流程结束时发酵液仅存不到3L。用发酵液制作双层平板可以观察到噬菌斑，但出斑时间比发酵前蛭弧菌样品出斑时间要长而且出斑数量减少。

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总结：由于发酵罐泄露在事先并无征兆，造成出现状况后没有妥善的办法处理问题，使得取样所得样品失去测定价值，同时热蒸汽的渗入也使得罐内温度变化较大，对蛭弧菌的生长很不利。当所做的双层平板证明这次发酵液中蛭弧菌数量小而且活性低时，我们打电话进行了咨询，决定在下次上罐时做一些改进。

蛭弧菌侵入宿主细菌的方式十分独特，开始时以很高的速度（每秒高达100个细胞单位）猛烈碰撞宿主细胞，无鞭毛端直接附着于宿主细胞壁上，然后菌体以100转/秒以上的转速产生一种机械钻孔效应，加上蛭弧菌入侵时的收缩而进入宿主细胞的周质空间。蛭弧菌的端生鞭毛是赋予其这些生理特性的关键！如果发酵罐的叶浆转速过高时会对蛭弧

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菌的端生鞭毛造成致命破坏，使得蛭弧菌无法攻击宿主细胞，这直接导致蛭弧菌活性减弱，宏观上就表现为噬菌斑出斑慢，出斑少。

通过咨询我们还得知大肠杆菌可以在灭菌前加入，即把大肠杆菌与生理盐水共同加热，使大肠杆菌死亡。由于死亡的大肠杆菌菌体细胞结构已造破坏，细胞膜通透性改变，使得蛭弧菌侵入菌体的难度降低了，这样就可以使蛭弧菌增殖的速度变快，发酵时间变短，这对现实生产很重要。

所以我们在第二次发酵需要做的改进有：一、发酵罐的转速要降下来，咨询时对方建议我们把转速降到0，但因为我们的发酵罐搅拌方式是叶浆式的（对方是气升式的），所以经研究决定转速暂定于

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50r/min。 二、大肠杆菌在灭菌之前加入到发酵罐中，与生理盐水一同加热。灭菌后再加入蛭弧菌样品进行发酵。

第二次发酵流程

发酵过程：先配制30L的牛肉膏蛋白胨液体培养基，121℃灭菌

20min，冷却后接种。摇床30℃ 160r/min培养48小时，培养结束后

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4000r/min离心10min，加入适量生理盐水振荡，再离心10min，重复两次，最后加入生理盐水制成高浓度菌悬液，置于4℃冰箱保藏。这个过程与第一次发酵相同。由于10L小发酵罐泄露情况仍未得到修复，所以发酵使用的是100L大发酵罐。大罐长期无人使用积垢严重，用适量稀盐酸浸泡后用大量自来水冲洗。待其内部铁锈和霉斑冲洗干净后加入蒸馏水空灭一次。空灭结束后，把配制好的30L生理盐水倒入发酵罐中。把溶氧电极浸没于新鲜配制的饱和无水亚硫酸钠溶液中，待电极显示值稳定后标零点。标定结束后将溶氧电极插入相应的传感器接口，固定连接数据线，在发酵接种前标定满度。PH电极的标定应在灭菌前进行，用PH=6.86的缓冲液标定零点，用PH=9.18的缓冲液标定斜率。标定结束后将PH电极插入相应的传感器接口，固

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定连接数据线。打开蒸汽发生器准备灭菌，先向外套内通如热蒸汽，等罐内温度升到100℃以上时，向罐内通热蒸汽使温度上升到121℃，进入灭菌记时。灭菌1800s，这个过程中通过调节蒸汽阀门和排气阀来控制罐压和罐温。灭菌流程结束后，停止向罐内通热蒸汽，同时关闭蒸汽发生器。此时发酵罐冷却过程开始，系统通过控制电磁阀的开启使冷水进入夹套，对发酵罐进行降温冷却。降温过程结束后设定发酵过程的各项参数，包括温度、转速、罐压，由于发酵罐内装的是已经调完PH的生理盐水（PH约为7），而且并未开启酸碱泵，所以设定的参数只有以上三个。这次发酵的参数与上次唯一的不同就是转数了，这次转数设定为50r/min，上次为150r/min，温度仍设定为30℃，罐压0.05MPa。待温度、罐压、通气量均已保持

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稳定正常下，以100%标定溶氧值，此时溶解氧是一个稳定的相对值。所有参数设定完毕，开始加样。把浸过酒精的火环放在加样口，点燃火环开始加样。把事先制备的保藏于4℃冰箱的高浓度大肠杆菌菌悬液加到发酵罐中，再加入蛭弧菌样品（上次的培养液，约为1.5L），旋紧加样口的金属塞，加样完毕开始发酵。加样过程中应防止染菌，最重要的是加蛭弧菌时加样应迅速通过火环，因为蛭弧菌对热很敏感，温度过高会使其灭活。

这次发酵过程为132小时，在发酵48小时后取出发酵液约10L。