电泳时不连续胶的作用(不连续电泳需要形成浓缩胶和分离胶)

不连续电泳需要形成浓缩胶和分离胶

1.关于凝胶的一些问题

胶的凝结不好，例如有花纹特别是浓度高的胶在冬天温度较低的情况下，在分离胶的下部有波浪样的花纹，凝胶不均匀。解决方法：加大TEMED和过硫酸胺的量，使其凝结速度加快。同时洗干净玻璃板，防止有残留的胶干结在玻璃板上。胶不凝，解决方法：

温度较低时加大TEMED和过硫酸胺的量，过硫酸胺必须新鲜配制。如若还是不行重新配制一下缓冲溶液。

胶易碎，例如浓度较高的胶在染色和脱色过程以及扫描过程中破裂。

解决方法：首先在上述过程中一定要动作轻缓，其次在室温较高的情况下可以适当减少TEMED和过硫酸胺的量。

电泳完后胶上有很多长条纹的杂带，解决方法：建议电泳缓冲液不要回收利用。配制胶的溶液一定要纯。

2.凝胶时间不对

通常胶在30分钟到1小时内凝。如果凝的太慢，可能是TEMED，AP剂量不够。 如果凝的太快，可能是AP和TEMED用量过多，此时胶太硬易裂，电泳时易烧胶。

3.浓缩胶与分离胶断裂、板间有气泡对电泳的影响。

前者主要原因是拔梳子用力不均匀或过猛所致；后者是由于在解除制胶的夹子后，板未压紧而致空气进入引起的，一般对电泳结果不会有太大的影响。

4.样品的处理

根据样品分离目的不同，主要有三种处理方法：还原SDS处理、非还原SDS处理、带有烷基化作用的还原SDS处理。

5.条带两边翘起中间凹下的原因

在较厚的凝胶中，由于凝胶不均匀冷却，中间部分凝固不好。电泳系统温度偏高。

处理办法：待其充分凝固再作后续实验。

6.条带两边向下中间鼓起的原因

一般原因是两板之间的底部间隙气泡未排除干净，或聚合不完全。

处理办法：可在两板间加入适量缓冲液，以排除气泡。

7.条带偏斜

原因：电极不平衡或者加样位置偏斜。

8.条带两边扩散

原因：加样量过多。

9.电泳的条带过粗

电泳中条带很粗是常见的事，主要是浓缩胶的原因。

处理办法：适当增加浓缩胶的长度；保证浓缩胶贮液的pH正确；适当降低电压。

不连续凝胶电泳三种效应

1)在一定浓度时，凝胶透明，有弹性，机械性能好；

(2)化学性能稳定，与被分离物不起化学反应，在很多溶剂中不溶；

(3)对pH和温度变化较稳定；

(4)几乎无吸附和电渗作用，只要Acr纯度高，操作条件一致，则样品分离重复性好；

(5)样品不易扩散，且用量少，其灵敏度可达10-6ug(6)凝胶孔径可调节，根据被分离物的分子量选择合适的浓度，通过改变单体及交联剂的浓度调节凝胶的孔径；

(7)分辨率高，尤其在不连续凝胶电泳中，集浓缩、分子筛和电荷效应为一体。因而较醋酸纤维薄膜电泳、琼脂糖电泳等有更高的分辨率。

说明不连续电泳中的浓缩效应主要是怎样引起的

果蔬汁的冷冻浓缩应用了冰晶与水溶液的固-液相平衡原理。当水溶液中所含溶质浓度低于共溶浓度时，溶液被冷却后，水（溶剂）便部分成冰晶析出，剩余溶液的溶质浓度则由于冰晶数量和冷冻次数的增加而大大提高，这即是冷冻浓缩果蔬汁的基本原理。其过程包括如下三步：结晶（冰晶的形成）、重结晶（冰晶的成长）、分离（冰晶与液相分开）

不连续电泳中的浓缩效应是怎样引起的

你的胶浓度太高了，所以会跑不动，一般浓缩胶用4.5%，分离胶用7.5%的，我最近也在做这个实验呢，祝你能有个好结果！！

不连续page电泳中浓缩胶中称为快离子的是

（本实验以转移到PVDF膜，辣根过氧化物酶HRP-ECL发光法为例）在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）中，不连续系统的凝胶包括浓缩胶（spacergel）和分离胶(separation gel)，蛋白质在浓缩胶中运动到两层凝胶的交界处时，由于凝胶孔径的不连续性使样品迁移受阻而压缩成很窄的区带，即不连续系统的浓缩效应。

在凝胶中，分子量小的蛋白质泳动速度快，分子量大的蛋白质泳动速度慢，即聚丙烯酰胺凝胶的分子筛效应。阴离子去污剂SDS使蛋白质变性，消除不同蛋白分子间的电荷差异和结构差异，使得蛋白质在电场中的泳动速度仅与蛋白质颗粒大小有关。各种蛋白质在不连续SDS-PAGE的浓缩效应和分子筛效应的作用下，按照分子量大小以一定顺序排列形成一个个区带。