质粒载体flag标签的作用(质粒载体命名)
质粒载体命名
载体条件: ① 分子量小,携带外源DNA片段进入受体细胞; ② 复制子,能独立于染色体进行自主复制; ③ 多克隆位点(MCS); ④ 标记基因,便于选择; ⑤ 拷贝数高,易于分离; ⑥ 安全。
λDNA的特点 ① ?噬菌体为温和噬菌体。② ?DNA为双链线性DNA,长度为48502 bp,具有多种限制酶的识别序列,便于外源DNA片段的插入和置换. ③两端有cos位点,可以环化。cos位点(cohensive-end site): ?DNA两端各有12bp的粘性末端,粘性末端形成的双链区域称为cos位点。λ噬菌体基因组特点 ?DNA上有66个基因,有一半是必需的,与自身的活动有关;其他约1/3是非必需基因。λ噬菌体载体的优点 比一般质粒载体容量大的多,可达20kb; 体外包装反应效力高,通常比质粒载体克隆效率 高100倍,适于构建cDNA文库和真核生物基因组文库
质粒载体命名要求
(1)具有更小的分子量和更高的拷贝数,如pUC8为2 750bp,pUCl8为2 686bp,控制质粒复制rop基因的缺失,平均每个细胞即可达500~700个拷贝
(2)适用于组织化学法检测重组体,通过a-互补作用,利用菌落颜色筛选重组子。
(3)具有多克隆位点区段(MCS)可以定向克隆防止载体自我连接。
质粒载体命名方法
①能在宿主细胞中复制繁殖,且有较高的自主复制能力。
②容易进入宿主细胞。
③容易插入外来核酸片段,插入后不影响其进入宿主细胞和在细胞中的复制。
④容易从宿主细胞中分离纯化出来。
⑤有容易被识别筛选的标志。不是所有的质粒都具有这五个特点,具体要根据宿主细胞进行分析和对质粒进行改造。
质粒载体命名原则
质粒载体可以作为质粒,它是在天然质粒的基础上为适应实验室操作而进行人工构建的质粒。与天然质粒相比,质粒载体通常带有一个或一个以上的选择性标记基因(如抗生素抗性基因)和一个人工合成的含有多个限制性内切酶识别位点的多克隆位点序列,并去掉了大部分非必需序列,使分子量尽可能减少,以便于基因工程操作。
质粒载体标签是什么
质粒是原核生物的遗传物质形态为环状DNA,其特点有结构简单所含有的基因少同时含有多个可切位点,其环状结构让它在复制过程中更加的稳定。在应用方面常作为目的基因的表达载体
质粒载体命名规则
为了检测目的基因是否成功导入 。 假若标记了X霉素的抗性基因 ,那么质粒成功导入的个体中就应该能抗X霉素 。在X霉素的环境下培养, 生存下来的就是成功导入质粒的。 这样就能筛选出来成功导入质粒的个体
质粒载体的命名
启动子来自目的基因,启动子的作用是负责启动转录,在编码区开始转录,当遇到终止子时转录停止,转录出来的mRNA再进行剪接(剪接时剪掉内含子,拼接外显子),然后形成成熟的mRNA,再进行翻译过程,mRNA上的起始密码子负责启动翻译过程,终止密码子负责终止翻译过程。
表达质粒载体的定义
噬菌粒实际上是带有丝状噬菌体大间隔区的质粒载体,是集质粒和丝状噬菌体的有利特征于一身的载体,具有ColEI复制起点及抗生素抗性选择标记的质粒,以及丝状体噬菌体的间隔区。
此间隔区含噬菌体DNA合成的起始与终止及噬菌体颗粒形态发生所必需的全部顺式作用序列。
质粒载体的用途
是在天然质粒的基础上为适应实验室操作而进行人工构建的质粒。与天然质粒相比,质粒载体通常带有一个或一个以上的选择性标记基因(如抗生素抗性基因)和一个人工合成的含有多个限制性内切酶识别位点的多克隆位点序列,并去掉了大部分非必需序列,使分子量尽可能减少,以便于基因工程操作。