荧光定量各试剂的作用(相对荧光定量)

相对荧光定量

ct=-klgx0+b（线性方程）用这个方程可以通过ct值算出样品的起始浓度

斜率=-1/lg(1+e)

扩增效率e=1,斜率=-3.32

扩增效率范围：90%-110%

斜率范围：-3.1和-3.59之间

△△ct这是相对荧光定量的一个计算公式的简化形式，用于比较不同样品之间的差别或变化比率

例如，想看a基因和b基因在某细胞系中表达量的差别，选取18s作为内参基因，就用a基因的ct值减去18s的ct值，得到△ct1，用b基因的ct值减去18s的ct值得到△ct2，然后用△ct1-△ct2=△△ct，而a，b基因的表达量差别为2（-δδct）次方，当然这中计算方法是基于荧光定量的数学计算模型简化来的，平时随便用用没什么问题，如果你的两个目的基因的扩增效率不一样，这个计算方法是不能用的。

相对荧光定量结果怎么计算

△△Ct是荧光定量计算公式的简化形式，用于比较不同样品之间的差别或变化比率。 Ct=-1/lg(1+Ex)*lgX₀+lgN/lg(1+Ex)，其中，n为扩增反应的循环次数，X₀为初始模板量，Ex为扩增效率，N为荧光扩增信号达到阈值强度时扩增产物的量。△Ct(n)=Ct（目的基因）-Ct（内参基因）；△△CT(n)=△Ct(n)-△Ct(1)。 起始拷贝数越多，Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，其中横坐标代表起始拷贝数的对数，纵坐标代Ct值。

因此，只要获得未知样品的Ct值，即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。

相对荧光定量和绝对荧光定量的区别

化学发光（ChemiLuminescence，简称为CL）法是分子发光光谱分析法中的一类，它主要是依据化学检测体系中待测物浓度与体系的化学发光强度在一定条件下呈线性定量关系的原理，利用仪器对体系化学发光强度的检测，而确定待测物含量的一种痕量分析方法。化学发光法在痕量金属离子、各类无机化合物、有机化合物分析及生物领域都有广泛的应用。

某些物质受一定波长的光激发后，在极短时间内（10-8秒）会发射出波长大于激发波长的光，这种光称为荧光。这一发光现象在各方面的应用及有关的方法称为荧光技术

相对荧光定量分析计算公式

ct mean,是你相同样品的几个重复的CT值得平均值如果是做的相对定量，用CTmean的结果就可以了，计算方法就是R＝2-ΔΔCt，现在很多仪器你只要设置的时候明确标出内参基因和目的基因，这个结果也是会有自带给计算出来的。如果你是做绝对定量，那更方便，你只要在仪器设置的时候把你的标准品含量依次输入，最后会自动生成标准曲线什么的，你最后只要分析og sq的结果就可以了。

相对荧光定量定义

荧光定量PCR会加入带有荧光基团的探针，探针是能和目的基因结合的单链DNA，如果合成双链DNA后，荧光基团就会激活发光，所以实时检测反应物的荧光强度，反应的就是双链DNA的浓度，由于合成双链DNA的速率和模板浓度有关，所以和参考曲线比较以后是可以计算出模板的相对浓度，当模板是信号RNA是，其反应的就是基因发达的量。

相对荧光定量计算公式

△△Ct是荧光定量计算公式的简化形式，用于比较不同样品之间的差别或变化比率。 Ct=-1/lg(1+Ex)*lgX₀+lgN/lg(1+Ex)，其中，n为扩增反应的循环次数，X₀为初始模板量，Ex为扩增效率，N为荧光扩增信号达到阈值强度时扩增产物的量。△Ct(n)=Ct（目的基因）-Ct（内参基因）；△△CT(n)=△Ct(n)-△Ct(1)。 起始拷贝数越多，Ct值越小。

利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，其中横坐标代表起始拷贝数的对数，纵坐标代Ct值。

因此，只要获得未知样品的Ct值，即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。

相对荧光定量pcr原理

实时检测PCR扩增，在扩增的指数期对起始模板进行定量，在扩增过程中，荧光信号随着PCR产物的增加而增强。我们实验室使用的BIOGHSC Super Probe Kit PCR实验检测DNA,测得的循环数在28左右，整个PCR过程有4个阶段，基线期---指数增长期---线性增长期---平台期，指数增长期内，PCR有高度重复性，一般的检测指标是看线性图谱的扩增曲线的起跳值（CT值）。

相对荧光定量pcr

在实时荧光PCR中。模板的定量有2种方法：绝对定量和相对定量。

绝对定量一般通过已知的标准曲线来确定我们所感兴趣基因的拷贝数； 相对定量指在一定样品中靶序列相对于另一参照序列的量的变化. 如果你做的是DNA的定量，可以用DNA 模板。

你用质粒作为标准品做标准曲线，最后可以换算出来拷贝数，这是绝对定量。

如果是做转录，表达量的变化，需要提取RNA，反转录为cDNA，然后再做相对定量。