冻存中dmso作用(细胞冻存时为什么常常会在冻存液中加入DMSO)
细胞冻存时为什么常常会在冻存液中加入DMSO
当然不是~DMSO对细胞有杀伤作用~一般作用浓度要小于千分之一~但要根据细胞种类来定~可以先做一个MTT检测DMSO浓度对该细胞的杀伤作用再确定浓度~一般在冻存细胞加十分之一DMSO防止快速冻存时冰晶产生~
冻存液在细胞冻存的作用
离心管是生物实验中最常用的器材之一，在许多的生物实验中例如DNA/RNA的提取、细胞及细菌的收集中均需要用到离心管。冻存管是用来保存DNA/RNA、细胞/细菌、组织、的一种器材，常保存于冰箱或者液氮之中。
现有的离心管和冻存管由于用处不同，设计上差异也比较大。一般实验中先采用离心管收集目标物质，在需要冻存的时候再将离心管内的物质转移至冻存管内。然而有许多分子实验，操作步骤多且目标物质量非常少(低于几十微升)，在这种情况下再使用移液器进行目标物质的转移又会造成损失，对于精细的分子实验来说非常可惜。但如果直接将离心管进行液氮冻存，普通离心管的管盖与管体之间的连接并不紧密，液氮可能在冻存的时候进入管体，从而导致在取出离心管的时候由于液氮快速气化造成管盖喷开，对实验人员存在较大的潜在风险。同时对离心管和冻存管还要配备不同的管盖，非常不便。
加冻存液的细胞放在4℃保存
低温保存细胞的原理，冷冻保护剂可以均匀充分地和细胞相接触，保护效果好。对组织而言，保护剂只能作用于其表面，对深层细胞无法起到保护作用。为了提高组织的存活率，应同时控制降温的速率。控制降温速率的慢速降温可以使细胞外溶液中的水结冰，导致细胞外溶液浓度升高，胞内水向膜外渗出，在达到一定温度时，将组织置于滦低温冰箱或液氮中冻存，可以减轻细胞内结晶对细胞的损伤，保持细胞的活性。
慢速冷却低温保存法是目前较为常用的保存方法，其工作程序为：失将细胞放在含有抗冻剂的溶液中进行预处理，接着用程序降温仪将细胞连同溶液以较慢的速度降温。首先是细胞外溶液中的水分结冰使溶液的浓度升高，细胞内的水分透过细胞膜向外渗出，细胞体积收缩，细胞内液的浓度与渗透压增加，冰点下降；随着温度的下降，上述过程继续进行，到一定的温度时迅速降低到一80℃(下冰温度)或一196℃(液氮温度)结冰，并在此温度下长期保存。在零下某一温度结冰时，先是凝结成小冰晶，细小的冰晶对细胞损害较少，但小冰晶表面势能大，往往互相结合成大冰晶。该现象易发生在一30℃一一40℃。大冰晶破坏细胞结构，使细胞坏死。即使小冰晶在冷冻过程中未完全形成大冰晶，在复温过程中也会结成大冰晶，同样导致细胞死亡。不同的细胞要求不同的降温速率，速率过快则在细胞内形成冰晶，在复温过程中细胞内冰晶会产生再结晶，而使细胞损伤。若降温速率过慢，会导致细胞收缩剧烈，并且细胞较长时间处于高渗溶液中也同样会造成细胞的损伤。降温的过程是传热与渗透两个因素相互作用的过程，所谓的最佳降温速率是指这两个因素的最好配合。
应用于低温保存皮肤、气管、血管等生物材料，在临床实践中的应用效果也比较理想。
细胞加冻存液没有及时冻存
在常温下，DMSO对人体有毒，故在配制时最好带手套。冻存液最好现用现配。在将细胞冻存管投入液氮时，操作过程中最好带防冻手套、面罩、工作衣或防冻鞋，动作要小心、轻巧，以免液氮从液氮罐内溅出，对皮肤造成冻伤。应注意控制冻存细胞的质量。
既要在冻存前保障细胞具有高活力，还要确保无微生物污染，这样的细胞才具有冻存价值。
另外，在每批细胞冻存一段时间后，可复苏1～2 管，以观察其活力以及是否受到微生物的污染。
冻存管宜采用塑料冻存管，不宜使用玻璃安瓿。
因为在复苏时，需要从-196℃的液氮中取出冻存管，立即投入37～40℃温水中，温差很大，玻璃安瓿瓶容易爆炸而发生危险。
冻存的细胞放在常温
放置在常温下就不可以用了
发酵粉要冷冻干燥保存。将乳酸菌冷冻后，在减压环境下利用升华现象除去水分。当菌体中的大部分水分被去除后，细胞的生理活动就会停止，从而达到了长期保藏的目的。
冷冻过程中产生的冰晶体会损坏细胞膜，导致细胞大量死亡，所以在冷冻干燥前需加抗冷冻保护剂，以减少细胞的损害程度。
酸奶不仅保留了鲜奶中的蛋白质、脂肪和糖类等营养成分，而且还能刺激胃酸分泌，增加食欲，促进人体新陈代谢，使营养易被吸收。
冻存液对细胞的影响
就是将细胞保存起来，一般细胞用细胞冻存液重悬以后，将细胞先放在-80度冰箱，过夜后可转移到液氮长期保存，理论上细胞在液氮里可以永久保存(实际上也就5-6年，所以要定期更新)，-80有的冻存液冻存的细胞可以保存2-3年。
细胞冻存稀释细胞用冻存液
胞培养技术指的是细胞在体外条件下的生长，在培养的过程中细胞不再形成组织(动物)。
培养物是单个细胞或细胞群。细胞在培养时都要生活在人工环境中，由于环境的改变，细胞的移动或受一些其他因素的影响，培养时间加长，传代导致细胞出现单一化型。
细胞体外培养生命期
细胞在培养过程中持续增殖和生长的时间。一般根据细胞种类、性状和原供体的年龄的情况而定。
如:二倍体成纤维细胞，在不冻存和反复传代条件下可传30~50代，相当于150~300个细胞增殖周期，能维持一年左右的生命，细胞便开始凋亡(apoptosis)。 细胞在生存过程中经历以下三个阶段
1.原代培养期(primary culture)
组织到第一次传代时间大约为1~4周
特点:
细胞移动活跃,但分裂不旺盛,多呈二倍体核型。
原代与体内原组织形态结构和功能活动基本相似。
各细胞的遗传性状互不相关，细胞相互依存性强，如果把这种稀释分散成单细胞,在软琼脂培养基中进行培养,细胞克隆的形成率(cloning efficiency)下降，表明细胞独立生存性差。
2.传代期(passage)
初代培养细胞一经传代便称之为细胞系(cell line)
特点:
细胞增殖旺盛，并维持二倍体核型，也叫二倍体细胞系(diploid cell line)为了保存二倍体细胞性质，细胞应在初代或传代早期冻存为好。
一般细胞在10代以内冻存。
冻存配方:
向培养液加入保护剂二甲基亚砜(DMSO)或甘油,封入安瓶中。
存于在液氮中温度可达到-196℃，可长期储存。如解冻后细胞复苏，仍能继续增殖生长，细胞性状不受影响，成为保存细胞最主要的手段。
3.衰退期
特点:细胞仍生存 增殖减慢 不增殖 轮廓增强 衰退凋亡
注意:细胞在三期中的任何一期(一般发生在传代后期或衰退期)在某些因素影响下,如血清质量不佳、病毒污染、温度和pH不稳等,细胞可能发生自发转化(spontaneous transformation);
细胞可能获得永生性(immortality) 或称为恶性性(malignancy)。细胞获得持久性的增殖能力,这样的细胞群体称为连续细胞系(continuous cell line)。而细胞获得不死性后,细胞核型大多变成异倍体(heteroploid)接触抑制消失。