免疫荧光中封闭液的作用(免疫荧光中封闭液的作用是什么)

免疫荧光中封闭液的作用是什么

pbs稀释。当然最好用封闭液直接稀释，再加一点tritonx100效果好。

培养液成分太多了。而且固定之后细胞都死了，用培养液没什么意义，只要保证其ph等条件适合就好了。

抗体说明书上都会有推荐的稀释倍数。上网查一下，有很多protocol。一般一比几百到一万都有，依抗体而定。可以4度过夜，这样染色效果好。

二抗一般较便宜，一般1：50到1：200多。

免疫荧光封闭液的作用是什么

不明白你想问什么。

但依你说的这种情况，应该是想求得解决方法吧。

只要将ECL显色液稀释后用，黑暗下荧光若隐若现，再压片时间久一点，3min，显出来的片子背景会浅很多，条带应该会相应好看很多

细胞免疫荧光封闭的作用

TBS 医学上为一种缓释剂，tris buffered saline 的简写。意思为三乙醇胺缓冲盐水溶液　或 triethanolamine buffered saline solution　的简写，意思为 三羟甲基氨基甲烷缓冲盐水。

TBS是Tris-HCl缓冲盐溶液，为等渗盐溶液加Tris-HCl缓冲液。

TBST即Tris盐缓冲液（TBS）加入了Tween -20，是生物学中常使用的等渗缓冲盐溶液。TBST作为一种非离子型去污剂,有复性抗原的作用,可以用于免疫印迹（WB）、免疫荧光（IF）、免疫组化（IHC）和免疫细胞化学（IC）等试验中封闭液的配置、一抗二抗的配置、一抗二抗孵育后的洗涤等，封闭和洗涤可以降低背景，增强信噪比。

免疫荧光中封闭液的作用是

热成像法：通过红外线热成像仪，可以辅助检测地暖管漏水点及管道走向；自来水冷水管需要注入温水后再检测。但热成像法对埋深大于15cm的管道效果不佳。

荧光法：封闭下水管，将荧光染料溶于水中后，倒入下水管道并施工压力，等待一段时间后用荧光手电筒照射漏水部位，看渗出物中是否含有荧光工业内窥镜法：工业内窥镜直径通常都小10mm，可以伸入肉眼观察不到的边角查找漏水点。因为其体积小，在检查主下水管时，可以只钻一个小孔就能达到检查目的。

免疫组化中封闭液的作用

封闭抗体阴性是IgG抗体阴性。是抑制淋巴细胞损伤破坏孕囊的物质。封闭抗体阴性的女性容易引起流产，需要治疗。封闭抗体阴性需要选择白细胞免疫治疗一达到封闭抗体目的，保护孕囊免受人体免疫细胞攻击。

免疫荧光血清封闭液配制

细胞免疫荧光的详细操作步骤

1，取出细胞爬片放到35mm或60mm用过的细胞培养皿里，PBS洗三遍。注意有的时候作的细胞爬片可能比较小，因此夹取的时候要小心。

2，4%多聚甲醛固定20分钟，PBS洗三遍。

3，0.2%Triton X 100通透10分钟，PBS洗三遍。

4， 与二抗相同宿主的血清封闭30分钟，PBS洗三遍。

5.，一抗4度湿盒内过夜，也可37度2小时，感觉前者效果好，PBS洗三遍。

6，二抗室温2小时，或者37度1半小时，PBS洗三遍。

7，最好用DAPI染核，然后直接照荧光片。

8，蒸馏水洗掉PBS，甘油封片，指甲油封片子的四周。

免疫荧光中封闭液的作用原理

最近一直在了解流式细胞术和流式分选的知识，看到这个问题想回答一下：

流式细胞仪是以流式细胞术为基础，快速精确的对单个细胞的理化性质进行定量分析和分选。分析流程为：制备单细胞悬液，用特异性荧光染料标记的抗体进行染色，经染色后的待测细胞在一定气体压力下被压入流动室，在鞘液的包裹下细胞呈单行排列，依次通过检测区域，在激光束的照射下细胞会产生散射光和激发荧光。这两种信号会同时被光电倍增管( PMT) 接收。接收后可转换为电信号，通过模/数转换器，将连续的电信号转换为可被计算机识别的数字信号，进行分析。

如上所述，流式细胞仪是由液流系统、光路系统以及检测分析系统三部分组成，部分仪器还具有分选功能，能对粒子进行充电和偏转从而实现细胞分选。

液流系统：通过产生压力使含有目的细胞的样本快速进入仪器，在封闭的样品管中利用样品和鞘液之间的压力差是样本聚集到光学分析系统；

光路系统：由不同的激光器发射出的激光照射到细胞表面产生光信号，而后经过不同的光路系统被接收。在流式照射室的分析点，激光照射到细胞表面发生散射和折射，并发射出散射光包括前向散射光（FSC）和侧向散射光（SSC）,同时细胞表面的荧光素被激发发射出荧光。前向散射光和侧向散射光检测器收集散射光转变为电信号；荧光则被聚光器收集，不同颜色的荧光被双色反光镜转向不同的光电倍增检测器，将荧光信号也转变成电信号。FSC和SSC是流式分析中两个非常基本的参数。FSC的值能代表细胞的大小，细胞的体积越大则FSC就越大。SSC则代表细胞的颗粒度，细胞内细胞器和颗粒度越大则SSC越大。

检测分析系统：荧光信号的强度代表了所测细胞膜表面抗原强度或细胞内物质的浓度，光信号转换为可被计算机识别的电信号。计算机把所测量的各种信号进行处理分析。

流式细胞分选是在流式细胞术的基础上进行的。在流动室的喷口上方配有一个超高频的压电晶体，产生的振动使喷出的液流形成均匀的液滴，待测细胞就分散在这些液滴之中。将这些液滴充以正负不同的电荷（对标有荧光素的细胞液滴带以负电荷；未标记荧光素的细胞液滴带以正电荷；而不含有细胞的液滴则不被带电荷），当液滴流经偏转板时，在高压电场的作用下偏转，落入各自的收集容器中，不带电荷的液滴落入废液容器，从而实现细胞的分离。

第一次回答希望能帮到你，如有理解不当的地方，欢迎指正！

免疫荧光固定液

简单染色方法:涂片→干燥→固定→染色→水洗→干燥→镜检

简单染色流程 (1)涂片：取一块干净的载玻片,并在其中央滴一小滴生理盐水(或无菌蒸馏水)。接种环在酒精灯上杀菌后从斜面挑取少量菌种(金黄色葡萄球菌或枯草杆菌)与玻片上的水滴混匀后,涂布成一均匀的薄层。涂布面一般以直径1cm大小范围为宜。

(2)干燥与固定：涂片最好在室温下使其自然干燥。亦可在酒精灯上微微加热,加速水分蒸发,但切勿过热。固定时,在酒精灯火焰外层尽快地来回通过2~3次,多为2~3s,以载玻片背面不觉烫手为宜,放置待冷后,进行染色。

(3)染色：在涂片上滴染色液一滴,使染色液覆盖涂片,染色约1min。

(4)水洗：斜置载玻片,在来自水龙头下用小股水线冲洗,直至洗下的水呈无色为止。

(5)干燥：用吸水纸吸去涂片边缘的水珠,置室温下自然干燥或微微加热,以加快干燥速度。注意用吸水纸时切勿将菌体擦掉。

(6)镜检：用显微镜观察,并用铅笔绘出细菌形态图。