蛋白相互作用pla实验(蛋白质相互作用的实验方法)

蛋白质相互作用的实验方法

　　蛋白质沉淀蛋白质在溶液中的稳定性是有条件的、相对的。如果条件发生改变，破坏了蛋白质溶液的稳定性，蛋白质分子则聚集成大的颗粒沉淀出来。

　　蛋白质溶液的稳定性与质点大小、电荷和水化作用有关，只要破坏这些条件，蛋白质自然会从溶液中沉淀出。

　　沉淀蛋白质有以下方法：

　　1、盐析法

　　2、有机溶剂沉淀法

　　3、重金属盐沉淀法

　　4、生物碱试剂和某些酸（三氯醋酸，磺基水杨酸，硝酸等）沉淀法

　　5、加热变性沉淀法

　　蛋白质变性：蛋白质的天然构象遭到破坏导致其生物活性丧失的现象。蛋白质在受到光照、热、有机溶剂以及一些变性剂的作用时，次级键受到破坏，导致天然构象的破坏，使蛋白质的生物活性丧失。

　　蛋白质分子凝聚从溶液中析出的现象称为蛋白质沉淀（precipitation），变性蛋白质一般易于沉淀，但也可不变性而使蛋白质沉淀，在一定条件下，变性的蛋白质也可不发生沉淀。

　　蛋白质所形成的亲水胶体颗粒具有两种稳定因素，即颗粒表面的水化层和电荷。若无外加条件，不致互相凝集。然而除掉这两个稳定因素（如调节溶液pH至等电点和加入脱水剂）蛋白质便容易凝集析出。

　　可以看出，如将蛋白质溶液pH调节到等电点，蛋白质分子呈等电状态，虽然分子间同性电荷相互排斥作用消失了。但是还有水化膜起保护作用，一般不致于发生凝聚作用，如果这时再加入某种脱水剂，除去蛋白质分子的水化膜，则蛋白质分子就会互相凝聚而析出沉淀；反之，若先使蛋白质脱水，然后再调节pH到等电点，也同样可使蛋白质沉淀析出。

蛋白质相互作用研究方法

这个课题很大啊.一般主要是针对人血清白蛋白就是HSA.小分子会与蛋白质的碱性氨基酸残基发生作用,会有范德华力,疏水相互作用力,静电等相互作用力.这其中涉及分子医学,蛋白质组学等多个学科.还要用到紫外吸收光谱,拉曼光谱,傅里叶红外,核磁共振,质谱,电化学等等技术.

蛋白质相互作用的检测方法

P=immunoprecipitation 免疫沉淀

IB=immunoblotting 免疫印迹

CO-IP=Co-Immunoprecipitation 免疫共沉淀

免疫沉淀 是利用抗原抗体特异性反应纯化富集样品中目的蛋白的一种方法。通常使目标蛋白同抗体-protein A/G形成免疫复合物沉淀而得以收集，然后通过western blot检测目的蛋白。

免疫共沉淀 是将样品中同抗体靶蛋白相互作用的蛋白一同随免疫复合物沉淀，可以检测两种目标蛋白质是否在体内存在相互作用，也可以确定一种蛋白在体内的相互作用蛋白。

免疫印迹你可以理解为Western blot一个意思，就是把分离好的蛋白转移到膜上然后用相应的抗体对其进行检测的方法。

如果用免疫共沉淀的蛋白的抗体去检测，那二者结合起来，可以研究体内蛋白质的相互作用

证明蛋白相互作用实验方法有哪些

低温不变

低温乙醇法是以混合血浆为原料，逐级降低酸度（从pH7.0降到pH4.0）。提高乙醇浓度（从0升到40%），同时降低温度（从2℃降到-2℃），各种蛋白在不同的条件下以组分（粗制品）的形式分步从溶液中析出，并通过离心或者过滤分离出来。

往蛋白水溶液中加入中溶性有机溶剂，如乙醇、丙酮等，主要是降低水分子的活度，降低溶液的介电常数，从蛋白分子周围排斥水分子，使蛋白分子之间通过极性基团的相互作用，在范德华力作用下，发生凝聚。

蛋白质相互作用的实验方法是

两种或两种以上食物蛋白质混合食用，其中所含有的必需氨基酸取长补短，相互补充，达到较好的比例，从而提高蛋白质利用率的作用，称为蛋白质互补作用。

常用的蛋白质相互作用研究方法有哪几种

意义把膜蛋白固定在细胞膜上，所有的跨膜区都具有这项功能。不过有的跨膜区还有自己其它的独特功能，所以不同蛋白的跨膜区功能有相同部分，也有不同部分。

蛋白质含有跨膜区，提示它可能作为膜受体起作用，也可能是定位在膜上的膜蛋白的膜锚定蛋白或离子通道蛋白。

首先要确定两个蛋白质之间有相互作用再去寻找结构域，可以用的方法有研究文献，如果有晶体衍射做出的相互作用结构域的报道，那么一定要仔细研究 要研究清楚目的蛋白的三级结构，比如螺旋、片层的蛋白起始和结束位点确定研究方法，常用的有酵母。

蛋白质有关实验

蛋白质印迹（免疫印迹试验）即Western Blot物、物化免疫遗传用种实验其基本原理通特异性抗体凝胶电泳处理细胞或物组织品进行着色通析着色位置着色深度获特定蛋白质所析细胞或组织表达情况信息

蛋白质印迹由瑞士米歇尔弗雷德希物研究所（Friedrich Miescher Institute）Harry Towbin1979提尼尔·伯奈特（Neal Burnette）于1981所著《析物化》（Analytical Biochemistry）首称Western Blot蛋白免疫印迹（Western Blot）电泳离细胞或组织总蛋白质凝胶转移固相支持物NC膜或PVDF膜用特异性抗体检测某特定抗原种蛋白质检测技术现已广泛应用于基蛋白水平表达研究、抗体性检测疾病早期诊断等面

蛋白质相互作用的实验方法是什么

Perrin于1926年首先描述了荧光偏振理论，他观察到溶液中的荧光分子在受到偏振光激发时，如果在激发时分子保持静止，该分子将发出固定偏振平面的发射光（发射光仍保持偏振性）。然而，如果分子旋转或翻转那么发射光的偏振平面将不同于初始激发光的偏振平面。

分子的偏振性与分子旋转驰豫时间成比例，分子旋转驰豫时间是分子转过 68.5度角时所用的时间。 分子旋转驰豫时间与粘度、绝对温度、分子体积和气体常数有关。

原理 ： 当荧光分子受平面偏振光激发时，如果分子在受激发时期（对于荧光素约持续 4纳秒）保持静止，发射光将位于同样的偏振平面。如果在受激发时期，分子旋转或翻转偏离这一平面，发射光将位于与激发光不同的偏振面。 如果用垂直的偏振光激发荧光素，可以在垂直的和水平的偏振平面检测发射光光强（发射光从垂直平面偏向水平平面的程度与荧光素标记的分子的迁移率有关）。如果分子很大，激发时发生的运动极小，发射光偏振程度较高。如果分子小， 分子旋转或翻转速度快，发射光相对于激发光平面将去偏振化。

荧光偏振的定义：

荧光偏振的应用

荧光偏振是特别用于研究分子间相互作用的技术。这种方法直接及时的检测示踪分子的结合 /自由率。荧光偏振实验在没有固相支持的溶液中进行，允许在低至皮摩尔级的范围内分析真实的平衡。荧光偏振检测并不掺杂样品，因此样品可以被再次处理并被重新分析用于评价 pH、温度和盐浓度改变对结合的影响。此外，荧光偏振实验是实时进行的，并不局限于平衡结合的研究。

应用领域概述

• 受体 /配体研究（如激素/受体检测）

• 蛋白质 /多肽相互作用

• DNA/蛋白质相互作用

• 酪氨酸激酶检测

• 竞争性免疫检测

荧光偏振技术的优势

荧光偏振技术比研究蛋白质与核酸结合的传统方法具有更多优势（特别是不生成有害的放射性废物）并且检测限更低，可达亚纳摩尔级范围。此外荧光偏振是真正均相的，允许实时检测（动力学检测），对于浓度变化不敏感，是均相检测形式（中间不含洗涤步骤）的最佳解决方案。

荧光偏振

ACTA POLYMERICA SINICA No. 4 （ 1998 ）

蛋白质的实验方法和实验现象

盐析：中性盐对蛋白质的溶解度有显著影响，一般在低盐浓度下随着盐浓度升高，蛋白质的溶解度增加，此称盐溶；当盐浓度继续升高时，蛋白质的溶解度不同程度下降并先后析出，这种现象称盐析。

透析：注入含鸡蛋清的氯化钠蛋白溶液，经过数小时，则可观察到透析袋内出现轻微混浊，此即为蛋白质沉淀。继续透析至蒸馏水中不再生成氯化银沉淀为止。