wb常用一抗作用(wb二抗作用)

wb二抗作用

一抗就是针对你的蛋白的抗体，一般比较特异，若你的蛋白不是常见的，则需要定制（譬如用你的蛋白注射兔子）二抗是针对一抗的抗体，看你的一抗来自哪种动物，它具有普遍性。不管你的蛋白是什么，只要是从某种动物譬如兔子中获得的一抗，二抗就都可以用同一种抗兔的。

所以商品化程度很高二抗上一般链接一些基团，经反应后显色可以检验目标蛋白

wb二抗的作用

western blot中封闭主要是起去除非特异性吸附的作用

在western blot转膜时，PVDF膜在甲醇活化后是带电的，因而在转膜时会将蛋白吸附。封闭的目的就是要将PVDF膜上无蛋白的部分空隙用奶粉填满，以免孵抗体的时候一抗二抗与之结合，产生非特异条带或者是背景杂乱。

所以western blot中封闭主要是起去除非特异性吸附的作用。

WB一抗和二抗

WB结果有决定性影响的因素是抗体的效价和如何正确使用手中的抗体。正确使用抗体可以保证抗体效价不被过分的拮抗，与抗原更加有效的结合，从而获得特异性和非特异性背景之间差异的最大化。每一个抗体都有其特性，因此我们必须通过WB预实验获得背景小，非特异性条带少的实验结果。

预实验的内容如下：1）确定一抗的稀释比例和孵育时间；2）选择合适的封闭液及封闭时间；3）调节合适的上样量，使内参条带灰度值趋于一致。

wb的二抗都一样吗

一个是用肉眼直接观测目的蛋白的大致位置，一个是通过转膜，一抗二抗结合，ECL显影得到目的蛋白的位置及大小

wb一抗作用

western blot中封闭主要是起去除非特异性吸附的作用 在western blot转膜时，PVDF膜在甲醇活化后是带电的，因而在转膜时会将蛋白吸附。

封闭的目的就是要将PVDF膜上无蛋白的部分空隙用奶粉填满，以免孵抗体的时候一抗二抗与之结合，产生非特异条带或者是背景杂乱。

所以western blot中封闭主要是起去除非特异性吸附的作用

wb的二抗是什么

实验原理

WB 是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测的方法。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。

与 Southern 或 Northern 杂交方法类似，但 WB 采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，「探针」是抗体，「显色」用标记的二抗。

经过 PAGE 分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达

WB二抗和一抗结合原理

WB又称免疫印记法.其原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。

通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。是将生物大分子物质通过不同途径转移到固相载体的过程。

其灵敏，可达ng级，用Ecl显色法理论上可达pg 级。方便，特异性高。