荧光素的作用(荧光素的性质)
荧光素的性质
1、异硫氰酸荧光素,简称“FITC”。是一种小分子荧光素,其效率取决于于溶液的pH值,因此,在使用FITC时应注意溶液的酸碱度。FITC分子量为389.4,最大吸收光波长为490~495nm,最大发射光波长为520~530nm,呈现明亮的黄绿色荧光。
FITC在冷暗干燥处可保存多年,是目前应用最广泛的荧光素。其主要优点是人眼对黄绿色较为敏感,通常切片标本中的绿色荧光少于红色。
2、藻红蛋白,简称“PE”。相对分子质量较大,约为240kD,最大吸收峰为564nm,当使用488nm激光激发时其发射荧光峰值约为576nm,故可能会对其它大探针产生空间位阻。
但PE的化学结构非常稳定,有很高的荧光效率,并易与抗体分子结合。需要注意的是PE作为天然染料,因来源不同可能造成荧光素结构上的微小差别,导致其特征的不一致。
3、PI和EB。两者都具有嵌入到双链DNA和RNA的碱基对中并与碱基对结合的特异性。为了获得特异的DNA分布,染色前必须用RNA酶处理细胞,排除双链RNA的干扰。
PI和EB不能进入完整的细胞膜,因此,又可以用于检测死活细胞。PI和EB各种理化性质相似,但PI比EB的发射光光谱峰向长波方向移动,因而在做DNA和蛋白质双参数测量时,PI的红色荧光和FITC的绿色荧光更易于区分和测量。另外,PI比EB测得的DNA分布的变异系统(CV值)低,所以PI得到更广泛的应用。
4、其它荧光素
单激光束三色荧光分析时,要求单激光激发,所选择的三种荧光素的发射光波长应该有所不同。除FITC(发射绿光)、PE(发射橙光)外,还应选择发射红光或深红光的藻红蛋白-花青素(phycoerythrin and cyanidinPC5)、叶绿素蛋白(peridinin chorophyll protein,PerCP)或藻红蛋白-德克萨斯红(phycoerythrin and Texas Red tandem,ECD)。因为这些荧光素在受到488nm的蓝光激发后,均发射出红色光或深红色的发射光。
(1)PC5和ECD是由在空间结构上互补的两个荧光素分子通过共价键结合而成,组成一个荧光分子。PC5由PE和cyanidin 5组成,ECD由PE和Texas Red组成。他们前一个分子的发射光波谱与后一个分子的激发光波谱相重合,这样,当前一个分子受激光激发后,产生的发射光可直接激发后一个分子,最后由后一个分子的发射光体现出整个组合的荧光特性。因此,此组成上说是两个分子,但表现为一个分子的物理性质。
(2)PerCP是从一种生活于深海区域的鞭毛虫中发现的色素,其功能为将可渗透入深海的落光传递至鞭毛虫的叶绿素发色基团,进而发出红光。需注意的是PerCP为单个分子。
(3)别藻蓝蛋白(allophycocyanin,APC)和花青素5(cyanidin 5,Cy5)这两种荧光素的激发光波长要求在630nm左右,需第二根激光来激发。
荧光素有哪些
荧光素自己可不会发光 需要光照才行 每种荧光素都有最大激发波长 关在黑房子里 用个紫外灯照试试 (我没试过)
什么颜色的荧光素都有 蓝色的荧光素也有很多
荧光素的性质是什么
PE是藻红蛋白的缩写(Phycoerythrin,PE)。是一种来源于藻类的色素(蛋白质性质的),其用途跟绿色荧光蛋白差不多,经常用来标记抗体等。它本身跟细胞核的颜色没什么关系。
藻红蛋白是从红藻中分离纯化的,能发出强烈的荧光,具有很好的吸光性能和很高的量子产率,在可见光谱区有很宽的激发及发射范围。
什么是荧光性质
荧光,汉语词语。又作“萤光”,是指一种光致发光的冷发光现象。当某种常温物质经某种波长的入射光(通常是紫外线或X射线)照射,吸收光能后进入激发态,并且立即退激发并发出比入射光的波长长的出射光(通常波长在可见光波段);很多荧光物质一旦停止入射光,发光现象也随之立即消失。具有这种性质的出射光就被称之为荧光。另外有一些物质在入射光撤去后仍能较长时间发光,这种现象称为余辉。在日常生活中,人们通常广义地把各种微弱的光亮都称为荧光,而不去仔细追究和区分其发光原理。 也指温度(不是色温)低温
原理
光照射到某些原子时,光的能量使原子核周围的一些电子由原来的轨道跃迁到了能量更高的轨道,即从基态跃迁到第一激发单线态或第二激发单线态等。第一激发单线态或第二激发单线态等是不稳定的,所以会恢复基态,当电子由第一激发单线态恢复到基态时,能量会以光的形式释放,所以产生荧光。
荧光是物质吸收光照或者其他电磁辐射后发出的光。大多数情况下,发光波长比吸收波长较长,能量更低。但是,当吸收强度较大时,可能发生双光子吸收现象,导致辐射波长短于吸收波长的情况发生。当辐射波长与吸收波长相等时,即是共振荧光。常见的例子是物质吸收紫外光,发出可见波段荧光,我们生活中的荧光灯就是这个原理,涂覆在灯管的荧光粉吸收灯管中汞蒸气发射的紫外光,而后由荧光粉发出可见光,实现人眼可见。
(1)激发光谱:发光材料在不同波长光的激发下,该材料的某一发光谱线与谱带的强度或发光效率与激发光波长的关系。
硒化镉量子点在紫外线的照射下发出荧光
(2)发射光谱:发光材料在某一激发光的激发下,其不同波长的发光强度的强弱变化。
(3)荧光强度:荧光强度与该种物质的荧光量子产率、消光系数以及含量等因素有关。
(4)荧光量子产率Q:量子产率表示物质将吸收的光能转化为荧光的本领,是荧光物质发出光子数与吸收光子数的比值。
(5)斯托克司(Stokes)位移:斯托克司位移为最大荧光发射波长与最大吸收波长之差。
(6)荧光寿命:当一束光激发荧光物质时,荧光物质的分子吸收能量后从基态跃迁到某一激发态,再以辐射的形式发出荧光回到基态,激发停止时,分子的荧光强度降低到激发时最大强度的1/e时所需的时间为荧光寿命。[
什么是荧光素
【荧光素】是将已知的抗体或抗原分子标记上荧光素,当与其相对应的抗原或抗体起反应时,在形成的复合物上就带有一定量的荧光素,在荧光显微镜下就可以看见发出荧光的抗原抗体结合部位,检测出抗原或抗体。
中文名称:荧光素
中文别名:荧光黄;荧光橙红
分子式:C20H12O5
分子量:332.31
【性状】
荧光素(又称为荧光黄)是一种合成有机化合物,外观为暗橙色/红色粉末,可溶于乙醇,微溶于水。在蓝光或紫外线照射下,发出绿色荧光。在多种应用(如荧光抗体技术)中被广泛用作为荧光示踪物。黄红色至红色粉末,溶于热乙醇、冰乙酸、碳酸碱和氢氧化碱,并显亮绿色荧光,不溶于水、苯、氯仿和乙醚;最大吸收波长493.5、460nm。与碳酸钠(钾)、氢氧化钠(钾)等强碱反应生成荧光素钠(钾),易溶于水,并有强烈绿色荧光(量子效率90%以上)。
【用途】
①吸附指示剂;
②氧化还原指示剂;
③荧光光度分析硫离子;
④滴定氯、溴和碘。
⑤防冻液重要的颜料,可使防冻液呈现出绿色荧光。
⑥化学分析的指示剂;
⑦生物染色剂和化妆品着色剂。
荧光素的性质和用途
荧光是物质吸收光照或者其他电磁辐射后发出的光。大多数情况下,发光波长比吸收波长较长,能量更低。但是当吸收强度较大时,可能发生双光子吸收现象,导致辐射波长短于吸收波长的情况发生。当辐射波长与吸收波长相等时,即是共振荧光。
常见的例子是物质吸收紫外光,发出可见波段荧光,我们生活中的荧光灯就是这个原理,涂覆在灯管的荧光粉吸收灯管中汞蒸气发射的紫外光,而后由荧光粉发出可见光,实现人眼可见。
扩展资料:
许多物质都可产生荧光现象,但并非都可用作荧光色素。只有那些能产生明显的荧光并能作为染料使用的有机化合物才能称为免疫荧光色素或荧光染料。常用的荧光色素有:
1、异硫氰酸荧光素(FITC):为黄色或橙黄色结晶粉末,易溶于水或酒精等溶剂。分子量为389.4,最大吸收光波长为490~495nm,最大发射光波长520~530nm,呈现明亮的黄绿色荧光。其主要优点是:人眼对黄绿色较为敏感;通常切片标本中的绿色荧光少于红色。
2、四乙基罗丹明(RB200):为橘红色粉末,不溶于水,易溶于酒精和丙酮。性质稳定,可长期保存。最大吸收光波长为570nm,最大发射光波长为595~600nm,呈橘红色荧光。
3、四甲基异硫氰酸罗丹明(TRITC):最大吸引光波长为550nm,最大发射光波长为620nm,呈橙红色荧光。与FITC的翠绿色荧光对比鲜明,可配合用于双重标记或对比染色。其异硫氰基可与蛋白质结合,但荧光效率较低。
4、藻红蛋白(R-RE):本品为无定形,褐红色粉末,不溶于水,易溶于酒精和丙酮,性质稳定,可长期保存。最大吸引光波长为565nm,最大发射光波长为578nm,呈明亮的橙色荧光。与FITC的翠绿色荧光对比鲜明,故被广泛用于对比染色或用于两种不同颜色的荧光抗体的双重染色。
荧光色素有哪些
荧光色是什么颜色?具体点的
有
荧光色在一般可见光照射下时,呈现无色,当在365/254纳米紫外灯照射下,呈现红、黄、绿、蓝等发光颜色。
荧光是物质吸收光照或者其他电磁辐射后发出的光。大多数情况下,发光波长比吸收波长较长,能量更低。但是,当吸收强度较大时,可能发生双光子吸收现象,导致辐射波长短于吸收波长的情况发生。当辐射波长与吸收波长相等时,即是共振荧光。
荧光色素大体上可分三大类别。
1、碱性荧光色素这类色素在酸性溶液中容易解离。其荧光组分带有阳电荷。因此也就是能和生物标本中的酸性集团进行离子结合。在碱性溶液中处于非解离状态.
2、酸性荧光色素在碱性溶液中容易解离,其荧光组分带阴电荷.
3、中性荧光色素弱酸性或弱碱性荧光色素为电中性色素.在荧光染色过程中其解离没有实际意义。这种色素多用于显示大分子结构
荧光素的荧光强度
当荧光物质本身是弱酸或弱碱时,溶液的pH对该荧光物质的荧光强度有较大的影响,这主要是因为弱酸弱碱和它们的离子结构有所不同,在不同酸度中分子和离子间的平衡改变,因此荧光强度也有差异。
在每一种荧光物质都有其适宜的发射荧光的存在形式,也就有相应的pH范围,一保持荧光物质和溶剂之间的离解平衡。
荧光素的性质和作用
荧光产生的原理:
光照射到某些原子时,光的能量使原子核周围的一些电子由原来的轨道跃迁到了能量更高的轨道,即从基态跃迁到第一激发单线态或第二激发单线态等。
第一激发单线态或第二激发单线态等是不稳定的,所以会恢复基态,当电子由第一激发单线态恢复到基态时,能量会以光的形式释放,所以产生荧光。
另外有一些物质在入射光撤去后仍能较长时间发光,这种现象称为余辉。在日常生活中,人们通常广义地把各种微弱的光亮都称为荧光,而不去仔细追究和区分其发光原理。
气态自由原子吸收光源的特征辐射后,原子的外层电子跃迁到较高能级,然后又跃迁返回基态或较低能级,同时发射出与原激发波长相同或不同的发射即为原子荧光。原子荧光是光致发光,也是二次发光。当激发光源停止照射之后,再发射过程立即停止。
扩展资料:
常见的荧光灯就是一个例子。 灯管内部被抽成真空再注入少量的水银。灯管电极的放电使水银发出紫外波段的光。这些紫外光是不可见的,并且对人体有害。所以灯管内壁覆盖了一层称作磷(荧)光体的物质,它可以吸收那些紫外光并发出可见光。
可以发出白色光的发光二极管(LED)也是基于类似的原理。由半导体发出的光是蓝色的,这些蓝光可以激发附着在反射极上的磷(荧)光体,使它们发出橙色的荧光,两种颜色的光混合起来就近似地呈现出白光。
石油及其大部分产品,除了轻质油和石蜡外,无论其本身或溶于有机溶剂中,在紫外线照射下均可发光,称为荧光。
石油的发光现象取决于其化学结构。石油中的多环芳香烃和非烃引起发光,而饱和烃则完全不发光。轻质油的荧光为淡蓝色,含胶质较多的石油呈绿和黄色,含沥青质多的石油或沥青质则为褐色荧光。所以,发光颜色,随石油或者沥青物质的性质而改变,不受溶剂性质的影响。而发光程度,则与石油或沥青物质的浓度有关。
参考资料来源:
荧光素本质
.在一定的波长范围内,若物质对通过它的各种波长的光都作等量(指能量)吸收,且吸收量很小,则称这种物质为一般吸收;若物质吸收某种波长的光能比较显著,则称这种物质具有选择吸收性.太阳光照射到海面时,一部分光被反射回来,另一部分光折射进入水中.进入水中的光线在传播过程中会被水吸收.水对光的吸收与光的波长有关,即水具有选择吸收性.水对波长较长的光吸收显著,对波长较短的吸收不明显.红光、橙光和黄光在不同的深度时均被吸收了,并使海水的温度升高.到一定的深度绿光也被吸收了.而波长较短的蓝光和紫光遇到水分子或其他微粒会四面散开,或反射回来.所以当海水明净清澈时,目光中被海水吸收最少的蓝光和紫光就反射和散射到我们眼里,我们看见的大海就呈现出蓝色.