液相色谱中缓冲盐作用(高效液相色谱流动相的缓冲盐)

高效液相色谱流动相的缓冲盐

液相色谱有正反之说，所以流动相和固定相也有类似的分类。

1.先说流动相： a.反相流动相：有机相甲醇、有机相乙腈、水相缓冲盐。缓冲盐的范围实在是太广了，磷酸盐缓冲液，醋酸盐缓冲液等等 b.正相流动相：乙醇、四氢呋喃、氯仿等等

2.固定相 a.反相：碳十八柱（C18）、碳八柱（C8）、苯基柱 b.正相：氨基柱、氰基柱、二醇基等等。

液相色谱缓冲盐的选择

当然可以用磷酸盐缓冲溶液,并且磷酸盐缓冲液也是反相液相色谱最为常用的缓冲盐之一了.相比于其它的酸碱或是盐类来说,磷酸及磷酸盐的非常低的响应会使液相色谱的基线非常平滑,噪音非常小,无论是做梯度还是等度,都会得到非常不错的基线,而且磷酸盐调PH也非常容易,从磷酸氢二钾到磷酸二氢钾或以磷酸和氢氧化钾调整PH2-8（主要看色谱柱的耐酸碱性,2-8是适合C8或C18的PH）非常方便和简单.当然有很多时候也可以用磷酸的钠盐,不过钠盐在有机相的溶解度没有钾盐好.

高效液相色谱流动相的缓冲盐的浓度

一般要看流动相的组成了。配置好的或已经开瓶的情况下有以下几条标准：

第一，纯有机相，比如甲醇，乙腈等为1个月。

第二，水相（含超纯水，磷酸水，乙酸水，缓冲盐水，离子对试剂等）为10天。

第三，水相与有机相混合的为10天。

第四，有效期内，每一到两天要进行脱气。水相每两天进行过滤、脱气。

第五，有效期内如发现有长毛和浑浊，视为变质要进行重新配制。

第六，流动相原则要现用现配，存储要注意季节及室内温度等情况。

液相色谱常用缓冲溶液

当然可以用磷酸盐缓冲溶液，并且磷酸盐缓冲液也是反相液相色谱最为常用的缓冲盐之一了。相比于其它的酸碱或是盐类来说，磷酸及磷酸盐的非常低的响应会使液相色谱的基线非常平滑，噪音非常小，无论是做梯度还是等度，都会得到非常不错的基线，而且磷酸盐调PH也非常容易，从磷酸氢二钾到磷酸二氢钾或以磷酸和氢氧化钾调整PH2-8（主要看色谱柱的耐酸碱性，2-8是适合C8或C18的PH）非常方便和简单。当然有很多时候也可以用磷酸的钠盐，不过钠盐在有机相的溶解度没有钾盐好。

高效液相色谱缓冲液

有以下几个原因：

1）乙腈和水完全互溶，不会出现分层；

2）乙腈和水在紫外末端波长的紫外线完全无吸收；

3）乙腈的极性比水小很多，可以调整流动相的极性，从而使样品出峰分离更好；

4）乙腈比较稳定，在水溶液中，不会水解变质。

高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。

液相常用缓冲盐

可以的。很多反相色谱的流动相里面都有缓冲盐，但是需要注意几点：一定要过滤，一个是确保盐物质溶解，一个是分析纯的盐里面有很多杂质，过滤干净才不会损害柱子。

含盐的流动相一定不要直接碰到纯的有机溶剂。就是说色谱柱里面如果是纯甲醇，用10%的甲醇水过渡一下，然后在换成流动相。

因为盐在水中溶解性很好，在纯有机相里面溶解度很差，容易析晶。如果析出的晶体黏在柱子或者仪器管路里面就完蛋了。

每天用完一定要拿10%的甲醇水或者10%的乙腈水冲洗，1.0ml/min的流速至少30min。

不光是为了过渡有机相，也是为了不让盐留在柱子里面。

液相色谱柱缓冲盐冲洗

清洗柱塞杆。

如果流动相用缓冲盐，容易结晶，固体盐对柱塞杆磨损严重。如果仪器安装了Seal wash组件，在运行过程中可使用10％的异丙醇/水冲洗，此时流出的液体最好当做废液，不循环使用；如果所用的流动相不含缓冲盐，则可用10％的异丙醇/水循环使用。10%异丙醇还有助于减小水的表面张力，并有抑菌作用