bsa在wb中的作用(wb用bsa封闭)
wb用bsa封闭
推荐用TBST进行稀释获得5%的牛奶封闭液（5g/100mL）。
很多人的经验是：脱脂牛奶封闭后背景比较干净，而检测磷酸化蛋白则用BSA（因脱脂牛奶含有较多的磷酸化蛋白，会干扰的）
wb封闭用bsa怎么配
Tween-20
Tween-20也写作Tween 20，也称Polyethylene glycol sorbitan monolaurate，中文名为吐温-20或吐温20。Tween-20为黄色或琥珀色澄明的油状液体，具有特殊的臭气和微弱苦味。分子中含有较多的亲水性基团，可与水、甲醇、乙醇、异丙醇、丙二醇、乙二醇、棉子油等混溶。是常用的非离子性去垢剂。
Tween-20的应用
Tween-20是一种非离子型表面活性剂。用途为水包油乳化剂、可用作溶剂、扩散剂、稳定剂、润滑剂和抗静电剂等。气相色谱固定液(最高使用温度120℃)分离分析挥发油、脂肪酸酯、醇、酮和卤化物。
Tween-20在Western blot 中的作用？
Western blot的操作流程中大部分都用到TBST洗液，而且还是封闭，一抗二抗孵育这种比较关键的步骤。通常Tween-20作为一种非离子型表面活性剂，效果和SDS、BSA作用差不多。由于膜上结合的蛋白会因为一些去污剂而被代替，因此在封闭时可使用Tween20清除去污剂，而且浓度不要超过0.3%（0.05%效果最好），如果牛奶封闭效果不好可以提高吐温浓度。在WB洗液里的吐温是和BSA一样，对抗原抗体蛋白提供保护作用，同时因为是表面活性剂（司盘加成亲水的环氧乙烷基团后的化合物），可以减少抗体对抗原的非特异性作用，用于洗脱未结合的抗体、减少非特异性结合。Tween-20是我们用TBST的时候Tween-20得用量是0.5ml/L，不加SDS。
wb封闭bsa浓度
1、封闭液的选用要求
1）常用封闭液为脱脂牛奶（光明或伊利等）、牛血清白蛋白（BSA）、无蛋白封闭液等
2) 封闭液浓度：封闭时一般用5%脱脂牛奶，也可用1-5%BSA或1%无蛋白封闭液；配制二抗稀释液一般为1-5%脱脂牛奶，全部用PBS稀释
3) 封闭时间：室温1-2h、4度过夜或37度半小时
4) 封闭液pH：一般5%脱脂牛奶pH大约为6.0-6.5左右，而1%脱脂牛奶可能6.5-7，好像RD公司的WB-Protocol中要求封闭液和稀释抗体的封闭液需要调pH至7.4；但是大多数抗体不调pH也可以做出来
5) 个人经验：5%脱脂牛奶封闭效果最佳，但有时也可能封闭过度，可以与BSA或无蛋白封闭液轮流更换
wb不封闭
WB结果有决定性影响的因素是抗体的效价和如何正确使用手中的抗体。正确使用抗体可以保证抗体效价不被过分的拮抗，与抗原更加有效的结合，从而获得特异性和非特异性背景之间差异的最大化。每一个抗体都有其特性，因此我们必须通过WB预实验获得背景小，非特异性条带少的实验结果。
预实验的内容如下：1）确定一抗的稀释比例和孵育时间；2）选择合适的封闭液及封闭时间；3）调节合适的上样量，使内参条带灰度值趋于一致。
WB封闭条件
pbs稀释。当然最好用封闭液直接稀释，再加一点tritonx100效果好。
培养液成分太多了。而且固定之后细胞都死了，用培养液没什么意义，只要保证其ph等条件适合就好了。
抗体说明书上都会有推荐的稀释倍数。上网查一下，有很多protocol。一般一比几百到一万都有，依抗体而定。可以4度过夜，这样染色效果好。
二抗一般较便宜，一般1：50到1：200多。
为什么用bsa封闭
取1g BSA，加蒸馏水，定容到100ml就行了Tween-20的复杂的抗原性，能提高特定的识别能力。蛋白或用一种惰性的非离子型去污剂韦斯滕印迹封闭的膜是不结合位点的抗体，可以减少非特异性结合。阻断剂应关闭所有不更换膜片目标蛋白的结合位点，标准委员会不绑定到目标蛋白，不交叉反应抗体检测试剂。最常见的封闭剂的牛血清白蛋白，脱脂奶粉，酪蛋白，明胶，和Tween-20（0.05 - 0.1％）的稀溶液。
wb用bsa封闭多长时间
封闭是Western Blot 至关重要的一部分， 所以正确的封闭液选择可以让抗体更特异地和抗原结合，为成功的WB奠定基础。
1、脱脂奶粉
最便宜而且最好买的封闭剂就属脱脂奶粉了。通常封闭液的浓度为 2.5-5% （w/v）。
2、牛血清白蛋白(BSA)
牛血清白蛋白是从牛血清中提纯之后的一种球蛋白，通常含有BSA的封闭液的浓度为2-5%（w/v）。
3、全血清
全血清是许多蛋白质的混合物，例如胎牛血清、兔血清、山羊血清等，同样可以被用来当做封闭剂。通常使用的浓度为 5-10%（w/v）。
wb封闭用什么
marker应该在转完膜孵育抗体之前就可以看到是否成功转至膜上了。在显影时，如果用的是带有CCD相机的仪器读取结果，目的条带读取化学发光信号，而marker要用明场单独拍摄；如果是采用压片，显影定影，则需要提前标记。希望对你有帮助！
wb bsa封闭
cea是癌胚抗原定量测定试剂。它的中心就是让抗体与酶复合物结合，然后通过显色来检测。
正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以保证实验结果的准确性。
有时本底较高，说明有非特异性反应，可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭