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DNA提取中乙醚作用(提取dna中乙醇的作用)

更新:2022-11-18 08:18编辑:bebe归类:美容美体人气:78

提取dna中乙醇的作用

因为在70%乙醇里DNA是不溶的,而盐离子却可溶。  沉淀DNA时总会加入高浓度的盐,加盐的目的是破坏能使蛋白质保持稳定的两个因素,使蛋白和DNA分离并沉淀下来。而此时盐的阳离子会与DNA结合形成DNA-阳离子盐溶于溶液中,再用无水乙醇可以将DNA-阳离子盐沉淀下来,但这样DNA中就含有较多的盐离子,这会影响下一步实验的进行,所以要用70%乙醇洗涤DNA沉淀。

乙醇提取DNA

以下是从动物病毒中快速提取DNA的方法,请参考该方案采用离心操作,适合于从动物组织样品中快速提取病毒基因组DNA。以下步骤都在室温下进行。

1.取50-100mg的动物组织加入约3倍体积的生理盐水进行匀浆,充分匀浆后10,000rpm离心2min去除残余组织。

2.取150μl上清液至新的洁净离心管中。

3.加入500μlDNA提取液至上清液中,颠倒混匀,室温静置5-10min裂解病毒。

4.把DNA吸附柱装在2ml收集管中,把裂解后的液体全部转移至DNA吸附柱中,10,000rpm离心1min。

5.倒弃滤液,把DNA吸附柱装回收集管中,加入400μl洗涤液至DNA吸附柱中,10,000rpm离心1min。注:洗涤液初次使用前请先加入48ml无水乙醇。使用完立即盖上盖,以防乙醇挥发。

6.重复步骤5。

7.倒弃收集管中的滤液,把DNA吸附柱装回收集管中,10,000rpm离心3min。

8.把DNA吸附柱装在新的洁净离心管中,加入30-50μl洗脱液至吸附柱中央,静置1-2min,10,000rpm离心1min,所得即为DNA溶液,可用于后续实验,若暂时不用,应于-20℃可储存。

dna提取中异戊醇的作用

原理就是去掉植物细胞壁

细胞膜

质体

线粒体

叶绿体

剩下细胞核了。就是DNA了。

通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞,由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响,在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性。在液氮中研磨,材料易于破碎,并减少研磨过程中各种酶类的作用。

十二烷基肌酸钠(sarkosyl)、十六烷基三甲基溴化铵(hexadyltrimethyl

ammomum

bromide,简称为CTAB)、十二烷基硫酸钠(sodium

dodecyl

sulfate,简称SDS)等离子型表面活性剂,能溶解细胞膜和核膜蛋白,使核蛋白解聚,从而使DNA得以游离出来。再加入苯酚和氯仿等有机溶剂,能使蛋白质变性,并使抽提液分相,因核酸(DNA、RNA)水溶性很强,经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。上清液中加入无水乙醇使DNA沉淀,沉淀DNA溶于TE溶液中,即得植物总DNA溶液

dna提取过程中异丙醇的作用

  用无水乙醇沉淀DNA,这是实验中最常用的沉淀DNA的方法。乙醇的优点是可以任意比和水相混溶,乙醇与核酸不会起任何化学反应,对DNA很安全,因此是理想的沉淀剂。  DNA溶液是DNA以水合状态稳定存在,当加入乙醇时,乙醇会夺去DNA周围的水分子,使DNA失水而易于聚合。  一般实验中,是加2倍体积的无水乙醇与DNA相混合,其乙醇的最终含量占67%左右。因而也可改用95%乙醇来替代无水乙醇(因为无水乙醇的价格远远比95%乙醇昂贵)。但是加95%的乙醇使总体积增大,而DNA在溶液中有一定程度的溶解,因而DNA损失也增大,尤其用多次乙醇沉淀时,就会影响收得率。折中的做法是初次沉淀DNA时可用95%乙醇代替无水乙酵,最后的沉淀步骤要使用无水乙醇。也可以用0.6倍体积的异丙醇选择性沉淀DNA。一般在室温下放置15-30分钟即可。

乙醇在dna提取中的作用

体积分数为50%的酒精 作用:洗去浮色。应用:脂肪的鉴定实验体积分数为95%的酒精 作用:

① 解离;

② 析出提取含杂质较少的DNA。 应用 ① 观察植物细胞的有丝分裂; ② DNA的粗提取与鉴定。体积分数为75%的酒精 作用:消毒杀菌 应用: 学习微生物的培养技术。无水酒精 作用:提取色素 应用:叶绿体中色素的提取与分离。工业酒精(一般是体积分数为95%的酒精) 作用:燃烧加热 应用: 此处包括各类必须加热的实验,如生物组织中还原糖的鉴定、比较过氧化氢酶和Fe3+的催化效率、探索淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用、DNA的粗提取与鉴定、温度对酶活性的影响、学习微生物培养的基本技术、自身固氮菌的分离等实验。

提取dna中乙醇的作用是什么

DNA Wash Buffer 用无水乙醇加水配的 用来洗柱子的buffer HB 应该不是一个盒子的吧?buffer EB 用来洗脱DNA的.一般是TE溶液.Solution I 溶解菌体的.50mmo1/L 葡萄糖5mmo1/L 三羟甲基氨基甲烷(Tris)Tris•HCl(pH8.0)1.0 mmo1/L 乙二胺四乙酸(EDTA)(pH8.0)Solution II 裂解菌体的.0.4mo1/L Na0H,2%SDS(十二烷基硫酸钠),用前等体积混合Solution III 中和液5mo1/L 醋酸钾 60 mL冰乙酸 11.5mL

rna提取中乙醇的作用

氯仿是分子量比较大的有机溶剂,在提取RNA时,氯仿可以有效的使有机相和无机相迅速分离.DNA提取过程 有机相中主要是酚和蛋白结合,从而使得蛋白和DNA脱离,DNA进入水相.但是在RNA的提取过程就要避免蛋白和DNA脱离,否则DNA会释放到水相.不管有酚也好,没有酚也好,氯仿本身也对蛋白有变性作用,剧烈的震荡,很容易使得DNA的亲水基团,与水相接触.所以不要剧烈震荡.

异丙醇的作用是通过-OH的疏水作用使得RNA 或者DNA链中的亲水基团受到保护,等同于沉淀,但是这是个反应时发生在水相中,与前面的氯仿不矛盾.

氯仿的作用有多个方面,一是作为有机溶剂变性蛋白,使其沉淀并通过离心除去,同时也通过变性作用抑制RNase活性;二是RNA提取试剂中通常含有苯酚(Trizol主要成分就是苯酚,很多自己配试剂提的方法也用苯酚,抽提蛋白时也会用到苯酚),苯酚微溶于水,抽提烷之后水相里有痕量的酚,如果不除去会损伤核酸,需要通过氯仿把水相里参与的苯酚抽提掉;三是作为溶剂抽提样品中的一些脂溶性杂质(比如油脂、脂溶性色素等),起到一定除杂作用

通常氯仿里面会加少量异戊醇(1/25),减少蛋白质在变性过程中由于震荡产生的泡沫,影响后续操作,不过个人经验感觉加不加没什么太大区别,也许是我的样品里蛋白不多吧

异丙醇是沉淀核酸用的,作用和乙醇一样.只不过用量少一点,0.6V~1V就够了,不像乙醇沉淀需要至少2V,一般需要2.5倍体积.在水相很多,离心管容积有限,加不下太多乙醇的时候一般会用异丙醇沉淀.不过感觉效果不如乙醇,偶尔会有沉淀不出来东西的时候

dna提取巯基乙醇的作用

巯基乙醇有消泡的作用。不然你加了CTAB在震荡过程中会出现大量气泡,影响后续操作。 不是用来防止DNA氧化的。 PVP粉才是用来防止氧化的。

乙醇在dna提取的作用

你的方法应该不是试剂盒法提取质粒,应该是比较传统的碱法提取。

我记得,在除去蛋白质沉淀后,要加入无水乙醇使质粒沉淀,然后离心除去上清,再加入70%乙醇清洗DNA沉淀,清洗两次左右。最后要把DNA沉淀溶于TE或ddH2O中。

乙醇浓度影响dna的提取吗

在70%乙醇中用枪头吧沉淀的DNA轻轻挑起,离心管轻轻颠倒几次,离心.如果DNA总拖尾,建议减少离心的转数或时间,沉淀不稳固的话倒上清的时候小心一点.在上一步用无水乙醇沉淀的时候,加入无水乙醇一定要快速混匀,局部的高浓度乙醇一会使DNA断裂.另外洗完沉淀一定要吹干啊。

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