蛋白相互作用试剂盒(蛋白相互作用实验)
蛋白相互作用实验
花生蛋白功能特性
花生蛋白能溶于稀碱溶液中，也能溶于10％NaCl或KCL溶液。作为一种植物蛋白资源被广泛应用于食品工业，除了作为食品添加剂外，更重要的是利用其功能特性。植物蛋白的功能特性是指能对食品质量产生影响的某些物理、化学性质。主要包括吸水性、湿润性、膨胀性、粘着性、分散性、溶解度、黏度、胶凝性、乳化性、起泡性等。这些功能特性不仅仅与蛋白质的氨基酸组成、分子大小及结构形态等固有属性有关，而且还与其他蛋白质相互作用的食物组分，如：水、离子、脂肪等及所处的环境如温度、pH值、电离强度等有关。在等电点pH=4.5，其溶解性、发泡性和持水性都最低。当温度达到55℃时溶解度开始下降，但随着温度的升高，起泡性增加，持水性下降。在蛋白质浓度约为3％时，其起泡性最好.
蛋白相互作用实验IP
分子的疏水集团与亲水集团是由分子的极性决定的，与分子正电中心与负电中心是否重合有关极性分子易溶于水，就称为亲水，非极性分子不易溶于水，称为疏水一般C链长的分子带苯环的都是疏水的，比如包括链烷烃基、环烷烃基、芳香烃、脂类等等 ，带有-OH -COOH 一般亲水初三的话应该不会太深，到有机化学时会细讲的
蛋白相互作用检测方法
比如G蛋白偶联受体，作为单体蛋白，其肽链反复跨膜七次。由于肽链反复跨膜，在膜外侧和膜内侧形成了几个环状结构，分别负责接受外源信号(化学、物理信号)的刺激和细胞内的信号传递。这类受体位于胞外的N末端或跨膜区可形成配体结合域，位于胞内侧的C末端有Ser/Thr的磷酸化位点，而连接跨膜区段的胞内环和C末端则形成G蛋白结合域。
单次跨膜蛋白不具有变构能力，胞外的结构变化传递不到胞内。然而多次跨膜蛋白却可产生别构效应。如GPCR经配体激活后与G蛋白结合，使后者构象改变，从而三聚体G蛋白被激活，进而激活其下游效应分子，如AC，PLC。G蛋白的效应分子再以催化产生小分子信使的方式传递信号，后者作用于蛋白激酶，后者磷酸化激活与代谢有关的酶、与基因表达相关的转录因子，从而产生细胞应答。
蛋白蛋白相互作用研究方法与原理
蛋白质二级、三级或四级结构发生改变 蛋白质的高级结构主要是由氢键以及疏水基或亲水基相互作用，以及π-π堆叠等低活化能的次级键组成，遇热时，次级键破坏，冷却后重新排列而导致结构变异。
重金属主要是通过与蛋白质中含硫、含氮、含氧等原子配位导致结构变异。酸碱有类似作用
蛋白相互作用实验原理
Pull down技术的基本原理是将一种蛋白质固定于某种基质上（如Sepharose），但细胞抽提液经过该基质时，可与该固定蛋白相互作用的配体蛋白被吸附，而没有被吸附的“杂质”则随洗脱液流出。被吸附的蛋白可以通过改变洗脱液或洗脱条件而回收下来。
通过pull down技术可以确定已知的蛋白与钓出蛋白或已纯化的相关蛋白间的相互作用关系，从体外转录或翻译体系中检测出蛋白相互作用关系。
蛋白质相互作用实验
1、转录起始水平。
这一环节是调控的最主要环节，由对基因转录活性的调控来完成，包括基因的空间结构、折叠状态、DNA上的调控序列、与调控因子的相互作用等。a.活化染色质：在真核生物体内，RNApol与启动子的结合受染色质结构的限制，需通过染色质重塑来活化转录。常态下，组蛋白可使DNA链形成核小体结构而抑制其转录，转录因子若与转录区结合则基因具有转录活性。因而基础水平的转录是限制性的，核小体的解散时必要前提，组蛋白与转录因子之间的竞争结果可以决定是否转录。组蛋白的抑制能力可因其乙酰化而降低。另外，由于端粒位置效应或中心粒的缘故，抑或是收到一些蛋白的调控，真核生物细胞可能出现10%的异染色质，异染色质空间上压缩紧密，不利于转录。b.活化基因：真核生物编码蛋白的基因含启动子元件和增强子元件（启动子：在DNA分子中，RNA聚合酶能够识别、结合并导致转录起始的序列。增强子：指能使与它连锁的基因转录频率明显增加的DNA序列。），转录因子与启动子元件相互作用调节基因表达；转录激活因子与增强子元件相互作用，再通过与结合在启动子元件上的转录因子相互作用来激活转录。两种元件以相同的机制作用于转录。真核生物RNApol对启动子亲和力很小或没有，转录起始依赖于多个转变路激活因子的作用，而若干个调节蛋白与特定DNA序列的结合大大提高了活化的精确度，无疑是这一作用机制的一大优势。在这一作用中，增强子与适当的调节蛋白作用以增加临近启动子的转录是没有方向性的，典型的增强子可以出现在转录起始位点上游或下游。RNApol与启动子的结合一般需要三种蛋白质的作用，即基础转录因子（又名通用转录因子）、转录激活因子和辅激活因子。能直接或间接地识别或结合在各类顺式作用元件上，参与调控靶基因转录的蛋白质又名转录因子。基础转录因子与RNApol结合成全酶复合物并结合到启动子上，转录激活因子可以以二聚体或多聚体的形式结合到DNA靶位点上，远距离或近距离作用域启动子。在远距离作用时，往往还会有绝缘子参与，以阻断邻近的增强子对非想关基因的激活；在近距离作用时，结构转录因子可以改变DNA调控区的形状，使其他蛋白质相互作用、激活转录。2、转录后水平。真核生物mRNA前体须经过5’-加帽、3’-加尾以及拼接过程、内部碱基修饰才能成为成熟度的mRNA，加帽位点与加尾位点、拼接点的选择就成了调控的手段。a.5’-加帽：几乎所有的真核生物和病毒mRNA的5’端都具有帽子结构，其作用为保护mRNA免遭5’外切酶降解、为mRNA的核输出提供转运信号和提高翻译模板的稳定性和翻译效率。实验证实，对于通过滑动搜索起始的转录过程来说，mRNA的翻译活性依赖于5’端的帽子结构。b.3’-加尾：3’UTR序列及结构调节mRNA稳定性和寿命
蛋白与蛋白相互作用的研究方法
构象的改变和生物活性的呈现密切相关。诱导契合学说就是指，酶在与底物相互作用下，具有柔性和可塑性的酶活性中心被诱导发生构象变化，因而产生互补性结合。
这种构象的诱导变化是可逆的，可以复原。不同蛋白质，对于同一种化合物，各自产生不同的诱导契合变化从而发生各自的相互作用。
构象因素，同一种化合物与不同蛋白质相互作用，有可能发生离子配位或（受体学说）化合物不同的构象可以与不同的蛋白质结合产生不同的效果（当然结合部位不同），蛋白质有诱导契合作用，令化合物的构象发生改变，两个构象都发生改变。
蛋白相互作用实验方法
细胞连接：多细胞生物题的细胞已经丧失了某些独立性，而作为一个紧密连接的整体进行生命活动，为达到各细胞的统一和促进细胞间所必需的联系，相邻细胞密切接触的区域特化形成一定的连接结构。
2、tight junction：紧密连接位于上皮细胞顶部侧壁，是由一系列跨膜蛋白和外周蛋白相互作用而形成的一个复杂的蛋白体系，多呈带状分布，具有维持细胞极性和通透性屏障作用。
3、锚定连接：是由一个细胞的骨架系统成分与相邻细胞的骨架成分或细胞外基质相连接而成的结构。根据起参与连接的细胞骨架成分，将锚定连接分为两类，一类是与肌动蛋白丝相连的，包括黏合带、黏合斑及隔状连接。另一类是与中间丝相连的，包括桥粒和半桥粒。
4、桥粒：是细胞内中间丝的锚定位点，它在细胞间形成钮扣式结构，将相邻细胞铆接在一起。桥粒连接处相邻细胞膜间的间隙约30nm，质膜的胞质侧有一致密斑，其成分为细胞内附着蛋白。桥粒斑上有中间纤维相连。通过桥粒，相邻细胞内的中间纤维连成了一个广泛的细胞骨架网络。
5、gap junction：间隙连接的基本单位为连接子。每个连接子是由6个连接蛋白环绕而成，中央形成直径约为1．5nm的亲水性低电阻通道。相邻细胞膜上的连接子对接便形成胞间连接，间隙连接常呈斑块状，一个间隙连接斑块内可含有几个甚至成千上万对连接子。
6、extracellular matrix：细胞外基质是由细胞分泌到细胞外空间的分泌蛋白和多糖类物质构成的精密有序的网络结构。细胞通过细胞外基质行使多种功能，两者之间相互依存，使细胞与细胞、细胞与基膜之间紧密联系，构成了各种组织与器官，使之成为一个完整的有机体。