高保真酶的作用(高保真酶原理)

高保真酶原理

高保真Taq酶，一种用于克隆的生物质酶，高保真Taq酶保真性的一个通用标准是错配率，错配率越低保真性越好。

Taq酶是从水生栖热菌 Thermus Aquaticus （ Taq ）中分离出的具有热稳定性的DNA聚合酶。一般常用的Taq酶可以分为rTaq酶和LTaq酶两类，LTaq酶的保真性更强，耐热性也比rTaq酶好。

普通Taq酶的错配率在10-5碱基/循环数，而高保真Taq酶错配率可降到10-6数量级，大大降低了出错的可能性；它适合对PCR保真性要求较高的实验，如基因筛选、测序、突变检测等。

高保真酶是什么

首先，DNA复制遵循碱基互补原则，即A和T配对，C和G配对，合成过程中严格遵循这一选择；

其次，DNA合成酶为高保真酶，其在合成过程中严格保证DNA依照模板进行合成；

最后，生物体内存在错配修复机制，也就是说，在合成过程中出现DNA复制错误，生物体内会有相应机制进行修复。

基于此，才能保证DNA复制过程中的高保真性。

高保真酶和普通酶

rtaq酶就是Taq酶. ExTaq实际上就是普通rTaq和Pfu DNA聚合酶(高保真酶) 的混合物!

酶的高保真性是什么意思

PCR可以直接以菌落做模板，比较方便，但有时候有假阳性；酶切鉴定需要提取质粒才能酶切，比较费时，且插入片段里不能有所选酶的酶切位点，在片段序列未知时不宜判定，但在序列已知时相对可靠。

如果片段较长，且是未用高保真酶做的PCR获得的，则最好做个测序。

高保真酶程序

这得看你PCR扩增的时候用的是什么酶，一般rTaq酶扩增出来的片段都是粘性末端。

但高保真Taq酶可以扩出平末端。你可以问卖试剂的人具体的rTaq酶名称。

高保真酶体系

1、DNA复制的准确性： DNA聚合酶依赖模板，保证遗传信息传代延续中子链与母链配对准确无误。DNA聚合酶具有核酸外切酶活性，复制中出错时有即时校读功能，随时把错误配对的核苷酸切除，并利用其DNA聚合酶活性补回正确的核苷酸。遵守严格的碱基互补配对规律。

2、RNA转录的准确性：RNA聚合酶以DNA双链中的有义链作为模板，严格按照碱基互补配对规律进行合成。RNA聚合酶能够识别模板上的启动子和终止子。

3、蛋白质合成的准确性：在氨酰tRNA合成酶的作用下，形成氨基酰－tRNA，进入核糖体。氨酰tRNA合成酶具有绝对的专一性，既能特异识别AA，又能特异识别tRNA，使tRNA与其特异AA结合。如出差错，酶还可以“校正”。蛋白质的序列是由mRNA分子上的密码子排列决定的。通过tRNA上的反密码子识别mRNA上的密码子，一个一个地按顺序进行识别，从而合成多肽链。

高保真dna聚合酶的工作原理

PCR（聚合酶链式反应）技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性→退火→延伸三个基本反应步骤构成：

①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备。

②模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合。

③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在72℃、DNA聚合酶（如TaqDNA聚合酶）的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。

重复循环变性→退火→延伸三过程就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。

酶的保真性

当反应体系的温度回升至72℃时，DNA聚合酶要以目的基因为模板将四种脱氧核糖核苷酸逐个按照碱基互补配对原则连接在引物之后。

由此可知，该DNA聚合酶应该耐高温，而且72℃最好是它的最适温度，可以采用Taq酶，此酶是从水生栖热菌 Thermus Aquaticus （ Taq ）中分离出的具有热稳定性的DNA聚合酶。

一般常用的Taq酶可以分为rTaq酶和LTaq酶两类，LTaq酶的保真性更强，耐热性也比rTaq酶好。